小鼠MSC冻存及复苏问题

若兰汀

说一下我的方法吧：细胞铺板90%左右弃培养液，用PBS洗涤两次，就可以用胰酶消化：50m2培养瓶加1ml胰酶，消化1分钟，镜下观察有少许细胞浮起（细胞开始收缩变圆）则立即弃胰酶，然后加入DMEM培养基（含20%-30%FBS）终止消化，一般50m2培养瓶我用4-5ml培养基终止消化。用吸管将细胞轻轻从壁上吹下来，再吹打均匀，最好不要敲击瓶壁，吹匀时不要产生气泡。将灭菌的冻存管准备好，每管加入0.9ml细胞悬液，再加入0.1mlDMSO（即DMSO:细胞为1:9）此过程要轻柔快速。然后置于4度，20-30分钟，-20度2小时，-80度过夜，长久保存则置于液氮中，2-3月内使用则放在-80度即可。据说DMSO遇到细胞悬液会产热使细胞受伤，所以本人倾向先加细胞再加DMSO，此顺序尚有争议。消化的细胞膜会有受损，且有评论指出DMSO在常温下有毒性，操作时尽量轻柔快速。照此法保存的细胞冻存3个月，复苏后活力不错，24小时后细胞均贴壁。