基于pSUPER载体的shRNA通用构建程序 - 实验室综合讨论区干细胞之家



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查看: 113706\|回复: 24	go [原创] 基于pSUPER载体的shRNA通用构建程序 [复制链接]

芷瞻

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楼主

发表于 2010-12-27 17:14 |只看该作者 |正序浏览 |打印

本帖最后由细胞海洋于 2010-12-27 19:28 编辑
' {4 _: R0 A' h K5 Y: r) \* n
在基因功能研究过程中，不可避免地涉及到该基因的过表达（Over-Expression）与敲除（Knock-Out ）/敲低(Knock-Down)实验，常用的Knock-Down方法有siRNA与shRNA，各有利弊，在此，我提供一种本实验室屡试不爽的基于pSUPER载体的shRNA通用构建程序，供大家参考，不对之处敬请包涵指教。

基于pSUPER载体的shRNA通用构建程序.pdf (519.72 KB, 售价: 包包 10 )

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25楼

发表于 2012-5-21 20:40 |只看该作者

太好了！！！

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cnsder

新手上路

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24楼

发表于 2012-5-20 17:09 |只看该作者

怎么看不了

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istephen

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23楼

发表于 2011-9-19 14:44 |只看该作者

厄我还差一点 = =|||感谢楼主分享了

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runsong

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22楼

发表于 2011-8-15 18:12 |只看该作者

回复 sylar.wy 的帖子! v( N- _+ X2 M# K, E# i
1 R+ l4 s) i, o* u, b
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sylar.wy

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21楼

发表于 2011-8-15 13:51 |只看该作者

回复 runsong 的帖子 ]& _( ?( ^. f3 p) w
3 g m6 w( m. \: N4 u5 e
两条长引物的合成价格贵。。超过不知道多少个碱基后价格就贵了，分4条可以省钱。。

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runsong

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20楼

发表于 2011-8-15 11:11 |只看该作者

有两个问题请教。
1、在U6启动子启动shRNA表达时，你是如何保证U6启动子的固定转录起始位点落在target sequence sence前的。你所加的通用引物骨架模板中的5-GATCCCC是不是起的这个作用。
2、合成的4条引物在变性退火后要不要用磷酸化酶处理一下，既然是普通的引物合成，那么5‘端是没有磷酸基的。还有你们要用4条引物，为何不用2条长引物呢，是怕突变吗。