脂质体转染

zerollx

  做脂质体转染时，对细胞的代数有没有要求？为什么？

guokeliuhen

回复 hhxxattxs123 的帖子: x, m1 x* B* q1 }6 c2 s
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电转的原理就是在细胞膜上打孔，所以对细胞的伤害基本上取决于打孔的大小。理论上电压越大打孔越大，外源物质进入细胞的几率越高，但是细胞越难恢复，从而导致死亡率高。好的电转仪既要能在细胞膜上打上合适大小的孔，又要能保证细胞能正常修复保证存活率，同时又要保证日常使用的低成本，比如试剂盒的费用等。据说日本的NEPA公司的电转仪采用了专利的外源物质导入技术，可以在同样打孔的条件下提高转染效率。至于具体的转染效率，不同来源的细胞转染的难易会有区别，同时细胞的状态对转染效率也会有影响。所以提高转染效率是个很复杂的工程。

guokeliuhen

回复 rainsky1314 的帖子  t* t* [: c! h; q- F- a* p  {

& c. E1 x3 [' B5 i, ]据上海的同学说他们实验室买了个不用kit的电转染仪，说效果还不错。

hhxxattxs123

回复 rainsky1314 的帖子0 Z$ e+ u7 t" u2 c" k* N
+ w% F- U( x3 n' z2 C. w1 B
电转对细胞的损伤大吗？还有转染干细胞的效率多少呢？

hhxxattxs123

回复 ayeqiu 的帖子3 o$ S" N+ G3 k+ \0 e; t

$ a3 @% s% t) D- J效率如何呢？

ayeqiu

我们用的是磷酸钙转染，细胞控制在20代以内，同时要要求细胞的状态一定要好，细胞融合度在85%左右。

janeyu

细胞代数的要求就根据不同的细胞而不同，有的细胞代数传多了容易状态发生改变当然代数越少越好，如果细胞状态很稳定，传代对细胞性质没有影响的话，代数的要求当然不那么重要了。总之，做转染的细胞状态一定要好，最好处于细胞的指数生长期，至于细胞的密度也不能完全按照说明80-90%，如果细胞生长速度很快的话，密度稍微低一点也不影响。

rainsky1314

细胞系无所谓，哪代都行，但细胞状态一定要好；原代的建议用电转，amaxa公司的不错，我们实验室就在用，效率也还行，要根据你的细胞选用合适的Kit

zerollx

谢谢……

hcluo

如果你选用时细胞系作为脂质体转染对象的话，我觉得应该没有问题，死亡不是很多，不过也得看转染的细胞类型。我们实验室在做脂质体转染时，原代细胞一般传代3到5次，另外，尽量选在细胞生长的对数期进行转染。这样的结果就是，转染效率也只是20%左右吧。不过最近出了一些新的转染方法和仪器（不依赖脂质体的），你可以去关注一下，据说效率很高。