VSVG质粒

shewawa

请教下，) o4 B+ Q  F* z# L( g
1.VSVG是什么？是什么病毒的质粒吗？' z7 ~6 C6 R( k' G
2.这个病毒怎么侵入宿主并且复制的啊？是破坏细胞膜结构吗？
% Z9 h) }, G: I* l) j: L3.VSVG质粒转染后，通过plat-e细胞产生的病毒感染细胞的种类，包括人类细胞吗？

markllq

1. VSVG是一种包膜蛋白（病毒正是通过包膜蛋白与宿主细胞识别，然后进入细胞），全称是疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G，因为这个蛋白具有广泛的宿主范围，因此我们在改造病毒载体的时候经常用这种包膜蛋白代替原来病毒中宿主范围较小的包膜蛋白。
3 l; J  F+ @$ [" R* \9 M% d0 T2. 受体介导的内吞作用，不会破坏细胞膜。( p) @. @! U, U
3. 通常将VSVG基因克隆到特定载体上作为包装质粒，与目的基因同时转染293T，产生的病毒颗粒可以感染多种人的细胞。

shewawa

回复 markllq 的帖子" |+ r# L/ W, Q

, _7 v& }8 `$ Q# I; u: X3 v崇拜ing……Thanks very much.还想弱弱的问问，是不是就是说被这个VSVG病毒颗粒感染后的细胞是不是就会变成1.上说的广泛宿主细胞呢？？我就可以用这个被VSVG感染的宿主细胞去感染很多原本不能感染的病毒了呢？？？打个比方，仙台病毒不能感染人细胞，那么被VSVG感染后的人细胞是不是就可以感染仙台病毒了呢？还请麻烦赐教~~

markllq

回复 shewawa 的帖子$ ]7 E5 h* J5 l) D) s  I

' F4 p6 A- s  t    不是这样的。
7 s* a( a- v# |) I& J   首先你清楚我们在做转染的时候，并不是将所有的病毒元件一次性转进去的，考虑到安全性，我们将将病毒的元件分为几个部分。举个例子：逆转录病毒主要包括三种核心蛋白，gag（核心蛋白基因），pol（复制、整合酶基因），env（表面抗原），通常将gag和pol整合到293中，env克隆到载体上作为包装质粒，目的基因插入到含有病毒的3‘LTR及5’LTR的载体中，这样转染以后在宿主细胞中三种蛋白同时表达组装成为一个完整的病毒。
8 _1 i/ d% o) E3 U( ?   很多病毒的env的宿主范围很小，只能感染少数种类的细胞，而VSVG是一种宿主范围很广泛的env，之所以说它就有广泛的宿主范围是因为这种抗原可以在很多细胞表面都能找到对应的受体，从而病毒可以通过内吞作用进入细胞。而宿主细胞被感染后表面受体的种类不会并不会发生改变。' T+ F- ?, r! y% r! j9 v
   不知道我说清楚没~

天山水

太给力了！！

hcluo

我们实验室构建的病毒载体，包括VSG-V（包装蛋白），pVpack-GP（整合蛋白），MMLV（目标蛋白）。三个质粒安装一定的浓度混合转染目标细胞，就可以了。

shewawa

回复 markllq 的帖子
" W" s% \1 [. [6 C/ _- a" z6 y
* v- I5 \* `" B* c9 F3 W! XGREAT！！！说的真是太爽了！不怪人家说我没文化呢，无比佩服了！！！. p8 D3 n8 T- m  m; C: G& J
讲的很明白但是本人无基础，还想再请教下：' {# s  W% o7 r! ~/ a  h
我在CSHL上的Principles of Retrovial vector design上面看到这句话# E. \* J( ^' W0 `
Retroviral env proteins replaced with the VSVG protein produce retroviral vectors with broad host range and improved virion stablity which allows concentration of the vectors to high titer.……; }5 P  a6 `0 r  S, Y
这是不是就是说将上面说的retrovirus的env换成VSVG我的Plasmid产生的病毒就可以感染很多的宿主了？？？那我制造出来的病毒还是retrovirus了吗？

shewawa

回复 hcluo 的帖子/ }1 ?( M8 q4 O0 h5 Y$ q

% j' `, U) O- Y& lThanks.3 H# p  U9 [$ w+ F, \) z
请问是说将上述的三个蛋白质粒转染产生病毒，再加上我想加入的其他目标质粒M转染得到的病毒就可以一起导入到target cell 里面了是吗？

markllq

回复 shewawa 的帖子9 s) ?( W) F  _

9 [( S4 \. f3 w, o: ?! ~9 O$ Y$ Y! c% j嗯，就是我说的那个意思，出来病毒当然是逆转录病毒，只是我们把其中的某个元件换了一下变的更实用了，你把联想电脑的鼠标换成惠普的，能说这电脑就不是联想了的吗？呵呵，再说不管它变成啥样了，是要符合我们的实验要求就是王道，比如，慢病毒就是从逆转录病毒改造来的，有很多优点，它能携带更大基因而且能转染非分裂期的细胞。

markllq

回复 shewawa 的帖子
3 L- q/ t# `6 j' v/ L: K/ k1 h
1 V( ?, G  a6 K1 s2 ]它们共转染可以实现含有目的基因的病毒的包装