关于N2B27培养基德配置

随风的天使

请教大家，在胚胎干细胞培养时使用N2B27，如何配置培养基，请大侠指教！谢谢！

深海寂寞鱼

to 随风的天使 ：
  s9 [% Z  T6 ?& h/ d7 y5 T, Z4 x2 T$ r' Q* J
     N2 (100x)  5ml/支, B27 (50x) 10ml/支, 直接加入到500ml的基础培养基里（比如，DMEM/F12）就可以了。
# k* L  L. v; U& F0 ?
" ~2 l0 S5 l1 ~. ~$ y/ A     这样就是通常文献中所说的，1% N2 and 2% B27。! T+ @7 T1 m5 \/ W
9 T$ S% A. ^( n2 B; t& b) `7 J
     希望我说明白了。

随风的天使

回复 深海寂寞鱼 的帖子2 p" F8 G1 S2 I, ]
! C8 R6 |! b" b/ j, V7 v) W
谢谢你，我看很多文献还要加胰岛素等等很多东西，如果培养胚胎干细胞它只是临时的代替血清吗？其余的成分是否需要改变呀？谢谢你！

深海寂寞鱼

随风的天使 发表于 2011-1-13 09:36
6 x4 g! o  B% G7 t% n$ C回复 深海寂寞鱼 的帖子3 P$ T, X0 X9 B) ?! @
- ]6 @- ]. J/ I; V4 l
谢谢你，我看很多文献还要加胰岛素等等很多东西，如果培养胚胎干细胞它只是临时的 ...

# ^/ J+ [3 t  m/ c+ rto 随风的天使：
& ~' `$ W8 ?% n& |
% S3 |! C- S3 R    B27和N2就是用来替代血清的。血清的成分十分复杂，而B27和N2的成份是完全清楚的。
  s1 R3 W: `" l  \- Z$ l
# F$ Z# u; y8 o    有关B27和N2的具体成份，请你参看论坛里的这个帖子：http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... 2B%B3%C9%B7%D6.html3 E1 T  r  i" l8 c7 @0 s. @
( `9 G2 C& ^2 E+ [2 i1 Z# k- X0 I! z
    这样你也就可以知道，其实B27和N2里面是有胰岛素的。( z" T1 ]6 R4 l/ ~% Q
6 \# i0 X6 p% I7 }
    我不知道你具体看的哪篇文献。你注意一下它是在加B27和N2以后又加了胰岛素吗？* w. D/ ^) `. y% n

  b4 u0 N8 M4 ^0 L    如果是这样的话，那么它就是为了提高培养基里胰岛素的浓度。这样或许可以促进细胞的增殖。
/ Z5 y/ F6 `/ r1 b- \  L/ ~5 S4 E2 R* m. w7 N* G* j
     当然也可能它是有选择性的加了B27里面的一些成份，所以加了胰岛素。
4 }3 m0 p1 j1 M+ n
# g& u5 |( {: q     多比较几篇文献，你或许就能发现规律。
- M$ n  c: B4 o- M
0 d" e$ l' H7 C! {! A5 A$ t     如果还有不明白的，欢迎继续讨论。

cicadacjk

如果你是按照Austin Smith他们的配方，则应该是
& C# \# x5 k0 H, r5 N+ c! V4 K; o0 F% v1/2 DMEM/F12 1/2 Neurobasal
# U) m, c: M& k2 j) e+0.5%N2 +1% B27& N; f2 X, l7 E% L8 k) j
这里是他们实验室的protocol
# v6 \4 r, L- O/ I  d: Z- l我自己试验用Knockout DMEM/F12养，问题也不大
' `( q# T$ J5 I; _$ \( {( \/ V1 s0 T# @& `

深海寂寞鱼

那你完全可以用他们实验室的配方。 Austin Smith的实验室的东西可信度很高。+ d4 i' m% ?6 J% }% `

, h7 B# b- z/ c. [, }你完全用Knockout DMEM/F12应该没问题。! R0 I4 f0 y0 B/ F

+ C' |) {3 y7 j你注意他把N2和B27的浓度减半了。) n- h% s' ]3 g# Z& e
7 n0 r7 D: j. ~& J8 ~& r
我觉得你就按你的方法做。只要实验结果是好的。 你发文章的时候就按你的方法写就行了。

安静的折腾

没有加bovine serum albumin fraction V吗1 ^7 D8 D" j/ J2 p, F

weddy2009

N2B27 (200ml)  1 j9 j& u4 |  k  E* N, D
Mix 100 ml DMEM/F12, $ Z& \+ M) x3 S
100 ml Neurobasal medium,
0 \7 Y8 O( e4 ^) e1 ml N2 stock, 2 ml B27 supplement, 3 T* g+ r9 D$ `- O" B& S1 r
1 ml Glutamine, 200 µl β-Mercaptoethanol.5 C9 H0 I, r* U9 V/ a# _6 C
我们实验室的protocol，很好用的

微笑ci

回复 weddy2009 的帖子
  e* S8 r& y9 Y3 U/ k& W
7 a3 ^9 e  O& g9 m9 Y+ o你好，请问这个培养基是用来养hES 的吗？我怎么觉得像神经分化用的呢？

weddy2009

回复 微笑ci 的帖子( k' u% ]0 p2 ~1 `) }) Y, h

: m$ N" |, a3 s6 I9 q楼上问的是N2B27的配方啊，我就指的是该配方，用来培养mES时的基础培养液