请教脐带间充质干细胞消化的问题

kongxiaoling

我消化后粘稠怎么能解决啊 ？

kongxiaoling

我用0.1%胶原酶消化了16小时   是不是太长了   请教有成功经验的同学  你们的具体方法，请指点一二

西瓜太郎

你是100mg+100ml的双蒸水吗？“1 r" F! H# a5 F" f# k) ^% n

片片枫叶红

kongxiaoling 发表于 2011-1-17 09:56
0 \: z8 h1 _- w' @我用0.1%胶原酶消化了16小时   是不是太长了   请教有成功经验的同学  你们的具体方法，请指点一二

$ u& I0 g- D- H. ^" g( z
你的消化时间会不会太长了呀？我们一般是加入 0.25％Trypsin-0.04%EDTA（T25 培养瓶用1ml，T75 培养瓶用1.5ml），轻轻旋转，使Trypsin -EDTA 覆盖培养器皿表面，消化1～2 分钟，用手轻拍培养器皿的壁，显微镜下可见约70％～80％左右的细胞变圆脱壁（可能消化的时间不一定是1～2 分钟，以显微镜下所见为消化依据）。
7 F  T7 d6 R1 n! j" B$ o" u注意：如果消化的时间已经过了2 分钟，而细胞还是只有一部分变圆脱壁的话，则可以采取
* l5 y" |5 ~/ I+ O& f以下做法：在一个离心管中加入3ml 脐血间质干细胞完全培养基，将部分已经消化脱壁的细
6 V6 c# E$ u3 \& x  S胞连同胰酶吸到离心管中，轻轻吹打混匀。利用残留的胰酶继续消化，或者补加胰酶，继续, t- i4 U5 {8 `, N, x( J
消化。但是总的消化时间不可太长。! \  k2 O; K9 X1 o7 v) ]
   立即加入3ml 或更多的脐血间质干细胞完全培养基，用吸管吸取液体，反复吹打培养器皿底壁，使细胞彻底脱离瓶皿底壁。
! O1 f7 C3 \8 [; t4 t（注意：吹打时动作不宜太猛，不要产生气泡。一般吹打5～6 次就可以了。）
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deron

6 O6 F7 M9 n  R6 g7 A* X

2 {! h8 R5 ~- G/ n" J( M7 F楼主的做的是原代的细胞培养？
* ?3 {6 p$ b' x% i) G8 K如果溶液过于粘稠的话，离心去上清——PBS重悬再离心去上清——PBS重悬再离心去上清…………重复到你觉得上清不再粘稠为止。0 r# ^( y# u7 s/ k
消化16h长不长？无所谓，视你的消化温度和消化情况而定。有时候我们4度过夜；也有37度2~3h的时候。

鹭岛之滨

哦，爱莫能助，我们用的是贴壁法。顶一下

ljzmy82

我用的也是贴壁法，贴壁法很简单了，为什么不试试呢，这样效果也好，祝你好运！

清影

回复 kongxiaoling 的帖子3 h, ?$ V  q1 Z7 ]+ R' a

# G6 |+ o+ k9 z6 M' w! d消化16小时，你的脐带剪碎状态是什么样子的？时间长短得根据你的脐带状态确定

清影

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4 y1 P4 a& y& K- m5 ?7 G( c
' M! U* ?9 {* }  H呵呵，刚开始我们也遇到了这样的问题，慢慢来，先找找粘稠的原因，再针对原因一一突破就可以了。

白衣小彩

看你脐带的怎么样，剪的不好即使很长时间，获得的细胞也不会很多，还影响细胞状态。我们师姐，剪就得一个小时，胶原酶消化5个小时。这个好像还得看组织和个人经验