请教脐带间充质干细胞消化的问题

kongxiaoling

我消化后粘稠怎么能解决啊 ？

kongxiaoling

我用0.1%胶原酶消化了16小时   是不是太长了   请教有成功经验的同学  你们的具体方法，请指点一二

西瓜太郎

你是100mg+100ml的双蒸水吗？“# a0 Z4 a) I% H

片片枫叶红

kongxiaoling 发表于 2011-1-17 09:56 . _& F) {' o* ~: ?
我用0.1%胶原酶消化了16小时   是不是太长了   请教有成功经验的同学  你们的具体方法，请指点一二

& x' j$ h7 O0 J( U你的消化时间会不会太长了呀？我们一般是加入 0.25％Trypsin-0.04%EDTA（T25 培养瓶用1ml，T75 培养瓶用1.5ml），轻轻旋转，使Trypsin -EDTA 覆盖培养器皿表面，消化1～2 分钟，用手轻拍培养器皿的壁，显微镜下可见约70％～80％左右的细胞变圆脱壁（可能消化的时间不一定是1～2 分钟，以显微镜下所见为消化依据）。" L& U' p. K2 ]; Q
注意：如果消化的时间已经过了2 分钟，而细胞还是只有一部分变圆脱壁的话，则可以采取: H# \" j' {- \; e6 T# V
以下做法：在一个离心管中加入3ml 脐血间质干细胞完全培养基，将部分已经消化脱壁的细
" G* Y5 p, J- Y8 T; O胞连同胰酶吸到离心管中，轻轻吹打混匀。利用残留的胰酶继续消化，或者补加胰酶，继续
2 F- r$ p' v) _: p# U8 s6 [消化。但是总的消化时间不可太长。2 _4 B. p- P' W  I  d
   立即加入3ml 或更多的脐血间质干细胞完全培养基，用吸管吸取液体，反复吹打培养器皿底壁，使细胞彻底脱离瓶皿底壁。" c2 w9 |1 ~3 [/ ^: |, @
（注意：吹打时动作不宜太猛，不要产生气泡。一般吹打5～6 次就可以了。）
4 x2 k# w8 f: B6 u1 D% E  t7 A# i! a

deron

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楼主的做的是原代的细胞培养？! j* K5 v- ~" Q& G3 c
如果溶液过于粘稠的话，离心去上清——PBS重悬再离心去上清——PBS重悬再离心去上清…………重复到你觉得上清不再粘稠为止。
" D: p; n+ f8 y. w/ z消化16h长不长？无所谓，视你的消化温度和消化情况而定。有时候我们4度过夜；也有37度2~3h的时候。

鹭岛之滨

哦，爱莫能助，我们用的是贴壁法。顶一下

ljzmy82

我用的也是贴壁法，贴壁法很简单了，为什么不试试呢，这样效果也好，祝你好运！

清影

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- p/ O! G6 b. G. s8 `
- h1 O9 O! a  C  `消化16小时，你的脐带剪碎状态是什么样子的？时间长短得根据你的脐带状态确定

清影

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7 f  v( O5 w) I& L( T: J3 U4 G$ w. a2 b4 M" n5 Q
呵呵，刚开始我们也遇到了这样的问题，慢慢来，先找找粘稠的原因，再针对原因一一突破就可以了。

白衣小彩

看你脐带的怎么样，剪的不好即使很长时间，获得的细胞也不会很多，还影响细胞状态。我们师姐，剪就得一个小时，胶原酶消化5个小时。这个好像还得看组织和个人经验