请教脐带间充质干细胞消化的问题

西瓜太郎

回复 ljzmy82 的帖子
7 ]  c% n' |5 F) h5 F0 I# W6 [9 q1 H$ }. E3 U# `
你好，有贴壁法的具体步骤么？有的话，麻烦你传下给我 谢谢 邮箱：aychengxuesong@sina.com

人医

我也是用帖壁法做的，感觉很好

tangyvhuang

kongxiaoling 发表于 2011-1-17 09:56
7 k) A  b2 V% T: U我用0.1%胶原酶消化了16小时   是不是太长了   请教有成功经验的同学  你们的具体方法，请指点一二

! G/ ]0 B( n% r( A* |
1，消化时间是根据你组织剪碎的程度有关，不管是剪碎组织还是平铺组织去消化16个小时都不算长，本身胶原酶对于细胞没有什么伤害。如果剪得碎的话4个小时就足够了，肯定会有残余的大块组织是消化不干净的，可以离心去除。* L+ }8 X- A& R6 S1 x) O7 P, D
2，消化完粘稠是很正常的，可以用pbs或者ns去5倍甚至10的稀释，3000离心20分钟，弃上清，再稀释，再离心。5 S' ?( A" }$ k
3，可以加入透明质酸酶同胶原酶一起消化组织，这样粘稠度就很低了，

tangyvhuang

楼上的，有贴壁法的步骤也给我一份呗：）qxhbhj@sohu.com

hailanlanyj

我也觉得贴壁法很好呢，值得一试

fengxuechunyang

胰酶消化的时候要注意温度，在适当的温度才能获得最佳的作用。我们用0.25%的胰酶，孵箱消化3分钟左右，效果很好的。

maxiaona

光用胶原酶一定会很粘稠的，而且消化的效果也不好，建议和dispase一起共同消化，这样既可以缩短消化时间，也可以解决粘稠的问题（只能相对来说会好一些）。还有就是消化后加大量的PBS稀释，不然真的不好处理。如果允许的话可以加一些用于组织消化的DNase 也会有帮助的。

ljzmy82

我一上传了个的脐带间充质干细胞分离方法—个人经验总结

susuloveq

回复 白衣小彩 的帖子! V# Q+ l, B0 E" H$ M

$ W0 F( P6 h( W# c剪就得一个小时？需要那么长时间剪吗？？4 I! G- h, z- J" j% v. [8 g! P

yinjiqingqq

建议消化时加透明质酸酶明显降低粘稠度，用大量的PBS稀释消化液费时费力