RNA保存

Sophia

请问，RNA在负80度下，能保存多长时间呀？谢谢！

钻石星辰

我用的nuclease-free water溶解 in vitro transcription 产物mRNA单链 进行转染实验，-80℃保存了一个月多，转染效果依旧很好。

tangyvhuang

如果是溶在depc水中的话，rna本身的质量很好的话﹣80保存一年是没有问题的，这个我试过。如果质量一般保存一两个月也没问题
) O) q( D) @+ |1 b- p如果是溶在甲酰胺中的话，rna本身的质量很好的话﹣80保存几年是没有问题的，如果质量一般的话保存一年也差不多

chleiwu

Trizol Reagent 061207.pdf (108.5 KB)

2011-1-24 21:52 上传

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RNA
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After homogenization and before addition of chloroform, samples can be stored at -60 to ; n7 o0 g9 t3 v: J1 b2 v8 ~0 e! A* r5 L
-70°C for at least one month. The RNA precipitate (step 4, RNA WASH) can be stored in 9 H2 I3 Z, }3 ?2 ?# g
75% ethanol at 2 to 8°C for at least one week, or at least one year at –5 to -20°C.

chleiwu

-80度一年没问题，-20度2各月内我用来反转也没问题

Sophia

谢谢大家！
8 r# }3 }- Q% |7 v

nydfy

如果不急着用可以沉淀于70%乙醇，-80°保存一年应该没问题！

qingbao

最好反转录成cDNA，cDNA放在-80度几个月一般都没什么问题。如果实在要保存RNA,那就注意防止RNase酶对它的降解。其实不光是保存，只要涉及到RNA的实验过程都要注意。RNase酶广泛存在且稳定，外源性的RNA酶主要存在于操作人员的手汗、唾液等，也可存在于灰尘中，可以说无处不在。在其它分子生物学实验中使用的RNA酶也会造成交叉污染。. P" {8 U. [3 G+ v; J' W# V% Z* Y

2 c. M9 I' C- K3 o) I在RNA试验中防止RNase酶污染的措施：! k/ c, e: y. ^, @0 r/ p3 r
1.有条件的话，最好要有独立的RNA操作专用区域，移液器等应为专用。
8 ^. d( U9 [, s2 p* `  t7 O3 ~2.操作人员戴一次性口罩、帽子、手套，实验过程中手套要勤换。0 L  n+ v' d" V% s2 F% A
3.玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。7 f, i' v* V1 @! _6 F& ^
3.塑料制品可用0.1% DEPC水浸泡过夜。
1 s+ }! L) k% q0 J4.配制溶液用0.1% DEPC，在37℃处理12hr以上。然后用高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22μm滤膜过滤除菌。
7 B; @, S& V6 w$ c# K6 C" {" O& x  V4 I1 Y
当然，要是实验室条件好的话，EP管之类的现在都有现成卖无RNase酶的，就是人家处理过的，这是比较偷懒快捷的方法。
, ?  Q7 u- N9 q/ a* T% d, C# [, x! h; P5 U* D7 A
顺便提醒一下， 焦磷酸二乙酯（DEPC）是一种蛋白质变质剂，为可疑的致癌剂，操作要在通风柜中进行。9 n  z: {: u# \) `$ [8 a& e8 @

luoziwei

1个月没问题

siyue13

如果是抽提好的RNA，建议不要保存，赶紧反转录成cDNA比较保险。
% H% _3 {0 F3 H8 L( R! S! G如果一定要保存RNA，请加入1/20体积的RNA保护剂（RNase inhibitor）,60摄氏度处理20分钟使可能污染的RNase失活。然后可以放入冰箱短期保存。
6 _/ C% ?7 b& @$ {$ E4 S如果是组织样本保存，一定加入样本保存液。比如Qiagen的RNAlater或者Tiangen的RNAstore。把样本切成小块浸泡在溶液中过夜，浸透之后再放入冰箱可长期保存。