密度梯度离心

新手

本人做外周血内皮祖细胞的分离，培养。抽取人外周血10ml，PBS等倍稀释，以1:1（或者2：1）叠加到人淋巴细胞分离液上，以2000转/分，20min离心，brake：6，温度：18度（离心机为HERMLE低温高速离心机），离心后只有3层，没有白膜层，请教各位那个地方出了差错呀？

新手

离心机是角式离心机，离心完后，最底层的红细胞都是偏向一边，这是不是和离心机有关呢？4 ]) H0 V& d: x! v2 O
稀释的血液叠加到人淋巴细胞分离液上后，半分钟红细胞就会自动往下沉降，离心之前界面就有些浑浊了，这会不会影响到离心后的分层？
: l# c2 _& m: N4 b+ S& @" m离心机上的brake是实验室老师建议这样调的，具体该调为多少呢？理由是什么呀？& w8 r9 a. Y6 g' x# N3 W3 x4 ?* |( n
多谢！！！！！！！