问个问题，人类iPSC做畸胎瘤

瑟瑟狼

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$ z  O. ~9 Y& Z" C1 j6 o! h. G& {1 c& S5 Q2 x' u/ g
今天刚刚检查了一遍老鼠。。。我的畸胎瘤出来了，各种开心，各种兴奋！！！
* ^6 b% F. Y) J) g- |5 Z' v. d4 ~6 A2 u8 c# j
我用的人的IPSC，BLAB/c 裸小鼠，注射时候是四周龄。。。
- M$ P+ P7 Y% Q8 l( \+ o) U雌雄我没设对照。。。- j) {2 Q1 t9 j+ R1 U. X2 q! Y
( t9 v4 m. w) P
至于说选用老鼠，关键是免疫抑制的问题。。。) H4 r# \8 S. i. Q- C
2 M+ m+ M# \# T" q/ Y) ~) K2 E4 n
BLAB/c是T细胞缺陷，SCID是T、B、NK细胞全都缺陷。。。
2 g' N3 j5 ]( ^/ @因为他们有免疫缺陷，所以饲养条件要求高
0 }- M& h9 u% V& e. O  f' P/ U; o5 |; h. l
至于注射时机，也很重要。。。
; R0 X5 c) M! t2 j% u# j3 m8 R成年裸小鼠（6--8周）较普通鼠有较高的NK细胞活性，但幼鼠（3--4周）NK细胞活性低下。。。1 ?% E2 ?9 f/ m, F9 x/ y

# `' k+ b! I8 |: B% G6 s5 L4 @: l+ V) F1 B( d" F
0 q& `. b( \: H

瑟瑟狼

回复 ghfvcat 的帖子2 b5 d, H. I! V! @

+ w7 w, G2 B" [8 h建议参考Takahashi《Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors》文献0 c  E+ V& r: s) R5 Z; u+ J

8 N* z3 v5 d( M2 R
! U) P- A7 A/ I$ q3 W- i
4 m* `' J' U$ I) @/ G, V我自己的克隆。。。$ h0 O. s) e. k9 Z5 y, K7 w, F

% F: X/ t! C1 K4 `
1 ?2 o$ t0 J# v5 T1 S$ P3 ?7 ?) D) ~8 _6 V6 m$ p, \
一个十厘米的皿我打两个点。。。每点200微升液体。。。
$ F5 w; `# y! K, e8 g
: Q+ I/ K0 h  h* i' ^( g4 x2 ^- r) B3 |
0 H, \( l& `" f
也有人说把克隆团块用胰酶消化计数，但我个人认为不好。。。! z! V& n% U8 P5 t7 h7 u  L! R( J
根据文献《Mitochondrial Metabolism Modulates Differentiation and Teratoma Formation Capacity in Mouse Embryonic Stem Cells》$ h5 M1 d0 A( l
. ?9 h2 [1 }* s
2 z) S( m3 i7 Q0 e- \6 Q* e
文献中有一个确定的观点，细胞越容易分化，成瘤率越低。。。  r9 W$ L- O! c7 o1 m! V
根据克隆传代经验，克隆团块是经不起胰酶消化的，消化之后分化率太高；# q2 k+ l7 \9 k+ M4 s1 u
就算是用四型胶原酶消化，也有一定的分化率；$ d  `9 c1 q( ~) t: s! m7 @
9 N/ V+ H( ?9 S$ Y) U# L& R7 H
所以参考takahashi的方法，用四型胶原酶消化之后收集克隆，不做计数，直接注射。。。
) R2 G, m, {4 B- \6 F
* z& a9 l& o, N1 Y6 M" C甚至可以用机械法把克隆一粒一粒收集下来，这样更保险，就是工作量大了一点。。。

瑟瑟狼

回复 ghfvcat 的帖子! B9 h" h7 _5 ^- @" d- c

% ]; }  w0 S3 U7 L# s& i# B. r8 u忘了给你说注射部位，一般在皮下松弛部位就可以，原则是成瘤之后不影响老鼠运动。。。