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回复 ghfvcat 的帖子
6 w* l4 O; |8 b& i
: m3 A3 { d& M0 p. w建议参考Takahashi《Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors》文献
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) |* a4 ~1 N" e我自己的克隆。。。& A% \! c0 }5 G- Z
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4 @& m T0 k0 h% L4 }一个十厘米的皿我打两个点。。。每点200微升液体。。。
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0 d3 a. m0 v+ v7 w- A4 t9 k5 m& T/ v, H. W k+ q8 J4 M+ K$ _. u! ] Z
0 L! K) @1 J) @8 K7 G: \
也有人说把克隆团块用胰酶消化计数，但我个人认为不好。。。2 E3 M9 h2 y/ r5 ^! b8 \& b
根据文献《Mitochondrial Metabolism Modulates Differentiation and Teratoma Formation Capacity in Mouse Embryonic Stem Cells》4 b4 o0 A: o5 k
& z# Y1 f. N0 M! C: a
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文献中有一个确定的观点，细胞越容易分化，成瘤率越低。。。
- J. D4 k8 W5 Q0 q8 [0 T根据克隆传代经验，克隆团块是经不起胰酶消化的，消化之后分化率太高；
0 w9 b+ y. j9 B. s- f$ Q8 H, s就算是用四型胶原酶消化，也有一定的分化率；
Y5 Q" K3 m& V5 {% z2 i1 u9 L3 k. }/ D9 `0 ?8 a& `( I8 g+ x& i. x
所以参考takahashi的方法，用四型胶原酶消化之后收集克隆，不做计数，直接注射。。。
# t' K7 c% h5 x8 J' ]4 J( D# N5 s" O9 R5 p# X. g! a/ A
甚至可以用机械法把克隆一粒一粒收集下来，这样更保险，就是工作量大了一点。。。 |
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发表于 2011-2-12 11:42
