问个问题，人类iPSC做畸胎瘤

ghfvcat

问个问题，人类iPSC做畸胎瘤的时候裸鼠行不？
9 I8 v; a6 T% k: O' G+ q我看文章上有的用裸鼠，有的用SCID鼠，甚至NOD-SCID的，问一下，裸鼠的成功率有多高？, V1 Y6 h1 z- j% y* [  ?
用雌的还是雄的有区别么？

ghfvcat

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$ ^4 g) P' M) ]7 r
( t: J8 F/ ~- n. H4 d回帖庆祝一下我的畸胎瘤成功长出，多谢瑟瑟狼童鞋，7 b4 G2 W4 {0 v2 {! E/ B8 j
再麻烦问一下，各位在上海的同仁，哪位实验室有切片机的，能否帮忙做个切片？实验室没有切片机，实在悲剧。' q* W# D+ \: ]8 U8 C

' v. A/ j8 `# s

gact

太给力了。。。这个贴 我收藏了。。

zsycgz

瑟瑟狼很给力！很不错哈！学习了！:lol

瑟瑟狼

回复 ghfvcat 的帖子
$ h  }# a! q# f/ z! o! n6 w: f! }. a$ S# q) W
忘了给你说注射部位，一般在皮下松弛部位就可以，原则是成瘤之后不影响老鼠运动。。。

瑟瑟狼

回复 ghfvcat 的帖子+ @% X4 ]& x8 Q6 }# u# \
1 o9 t4 F- Q& m. x; v' T6 p# e& L
建议参考Takahashi《Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors》文献
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) p4 l& J: }8 m2 b
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, n2 g% M2 J. N我自己的克隆。。。
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一个十厘米的皿我打两个点。。。每点200微升液体。。。
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, B, z( C1 D+ \+ k6 |0 n* k4 q! g3 k1 L. ^- d0 R
也有人说把克隆团块用胰酶消化计数，但我个人认为不好。。。3 @: S4 ?/ n% X
根据文献《Mitochondrial Metabolism Modulates Differentiation and Teratoma Formation Capacity in Mouse Embryonic Stem Cells》) l6 }$ l7 p6 j4 M5 D; m) k

$ \5 Q. U( Z3 ?
" t6 }( G% X% c: A3 q文献中有一个确定的观点，细胞越容易分化，成瘤率越低。。。
- z( x; y: j* V5 j7 @" h根据克隆传代经验，克隆团块是经不起胰酶消化的，消化之后分化率太高；% B4 l7 n  X0 V$ s* c( K
就算是用四型胶原酶消化，也有一定的分化率；
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所以参考takahashi的方法，用四型胶原酶消化之后收集克隆，不做计数，直接注射。。。7 h- `9 b! O' M4 u" y% S3 R

9 R3 u# K* g$ w7 M" Z8 }: W) A9 o甚至可以用机械法把克隆一粒一粒收集下来，这样更保险，就是工作量大了一点。。。

ghfvcat

回复 瑟瑟狼 的帖子; O% q, S- S3 e) N) ^
0 ~/ [3 [+ _" j) r# `4 l* l- b$ o
呵呵，恭喜恭喜，' x9 j  q+ b1 M3 X
还没开始打，心里没啥底。
0 X. F6 s2 z/ ]- c请问你一只老鼠打了多少细胞？打在什么部位？

瑟瑟狼

:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol- v0 ?% N; e/ a; U8 q  ]! l
- Y( B! u# @2 W7 n
今天刚刚检查了一遍老鼠。。。我的畸胎瘤出来了，各种开心，各种兴奋！！！4 q1 b5 @/ e* M, A
* W5 k. [3 q$ p; p& L  A! u" E+ R3 p
我用的人的IPSC，BLAB/c 裸小鼠，注射时候是四周龄。。。* w8 w3 X# y- ?- I7 |- A& u4 R
雌雄我没设对照。。。' _, y. |0 O; P4 S7 R8 x8 J- E! w

+ i& G% F% J$ _& d% W6 M  h% Q至于说选用老鼠，关键是免疫抑制的问题。。。9 r' |3 y0 n( L6 G) e0 x6 N8 S6 Q

0 y7 G/ |1 q  H( C- E1 B2 ABLAB/c是T细胞缺陷，SCID是T、B、NK细胞全都缺陷。。。0 F$ B  P3 U$ d( a2 Z3 |
因为他们有免疫缺陷，所以饲养条件要求高
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4 Y/ R9 O: q8 o: L8 K; z至于注射时机，也很重要。。。
0 n1 ]% p$ z% M  A/ q# Q9 ?成年裸小鼠（6--8周）较普通鼠有较高的NK细胞活性，但幼鼠（3--4周）NK细胞活性低下。。。
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