问个问题，人类iPSC做畸胎瘤

ghfvcat

问个问题，人类iPSC做畸胎瘤的时候裸鼠行不？
0 o7 _- H8 A) Y6 U  v我看文章上有的用裸鼠，有的用SCID鼠，甚至NOD-SCID的，问一下，裸鼠的成功率有多高？" ^& C- l8 s' l4 i+ ]7 M
用雌的还是雄的有区别么？

瑟瑟狼

:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol:lol
+ c( Y) P, j; s( I! {: u( A5 m5 ?/ H2 c) n' F: \- i
今天刚刚检查了一遍老鼠。。。我的畸胎瘤出来了，各种开心，各种兴奋！！！
, S4 f  D" q2 d7 D: X7 [+ [: E$ n- C+ t8 P, [% g. _1 G7 \
我用的人的IPSC，BLAB/c 裸小鼠，注射时候是四周龄。。。! w1 C# L- L" g9 a" ^1 x  Z- e
雌雄我没设对照。。。4 p% w( x. T  H- E: K% f

7 a% j1 J) A* i至于说选用老鼠，关键是免疫抑制的问题。。。/ }8 G3 K: ?8 [: M. K3 ?

( [0 M- W! L- pBLAB/c是T细胞缺陷，SCID是T、B、NK细胞全都缺陷。。。4 M9 A, |6 s! k) T+ S$ \
因为他们有免疫缺陷，所以饲养条件要求高) T. _. @$ T+ K+ T% _

) T2 V+ c4 f& a; b9 Z- {. ?至于注射时机，也很重要。。。
) a9 T2 v1 l3 `0 K# _9 x( ^! L成年裸小鼠（6--8周）较普通鼠有较高的NK细胞活性，但幼鼠（3--4周）NK细胞活性低下。。。  y/ \) q  P4 t7 B& ?9 X3 n% v
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) {6 k9 H+ t( }
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ghfvcat

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# I0 u* V+ v8 p7 f* x- |$ R" `
6 n' D" ~' O" ?1 S6 ?" N呵呵，恭喜恭喜，, g: t# m0 M3 n$ ?9 @. w
还没开始打，心里没啥底。
! c5 e4 s( {0 i请问你一只老鼠打了多少细胞？打在什么部位？

瑟瑟狼

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1 A; e+ T) s+ |2 ~8 k6 n% x
4 K: m2 P4 C1 R建议参考Takahashi《Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors》文献
2 ]1 ^3 L1 U7 q% a, u" q1 @3 d9 w+ ?9 B1 N5 m

$ D# d* r2 r0 M+ l
  p" c  W' p1 z5 }4 ^7 V4 a我自己的克隆。。。  N  g& f9 u! p( b

' O# ?  q& e, Y+ H) q$ z% `" @* x" }& W0 |2 N

$ {4 W; H  D3 Z8 Y( r8 Z  O0 k一个十厘米的皿我打两个点。。。每点200微升液体。。。! r7 ^$ g; s' ]6 \* o4 C) L
  r- p8 _: K& K

* X  }$ }; k3 b  o1 Z" z4 k8 v/ N8 w/ @6 `2 X4 ?) x0 e
也有人说把克隆团块用胰酶消化计数，但我个人认为不好。。。
  w+ Q, v0 _9 u% b根据文献《Mitochondrial Metabolism Modulates Differentiation and Teratoma Formation Capacity in Mouse Embryonic Stem Cells》
" J$ h7 a. X. ^& u
% T, G; M3 b2 |, [0 x4 N6 ^% F& W7 I
文献中有一个确定的观点，细胞越容易分化，成瘤率越低。。。' w$ G: L+ y5 g3 h1 g
根据克隆传代经验，克隆团块是经不起胰酶消化的，消化之后分化率太高；
% w- W. G& w# j" g3 S- J1 o; w就算是用四型胶原酶消化，也有一定的分化率；+ G1 l/ P4 Y) T$ u
5 @6 ?+ u- D- o+ O
所以参考takahashi的方法，用四型胶原酶消化之后收集克隆，不做计数，直接注射。。。- u1 Z7 ?: C0 g/ q+ G4 K

" b8 q* c. j# }9 w2 U甚至可以用机械法把克隆一粒一粒收集下来，这样更保险，就是工作量大了一点。。。

瑟瑟狼

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" N  h2 W. t9 h, o* s
9 B7 R& q8 T3 x* B6 K; ?忘了给你说注射部位，一般在皮下松弛部位就可以，原则是成瘤之后不影响老鼠运动。。。

zsycgz

瑟瑟狼很给力！很不错哈！学习了！:lol

gact

太给力了。。。这个贴 我收藏了。。

ghfvcat

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; {0 L$ q7 u$ k% C& p1 M4 N回帖庆祝一下我的畸胎瘤成功长出，多谢瑟瑟狼童鞋，
+ t1 J, O1 q  a6 C* W  U+ c1 w再麻烦问一下，各位在上海的同仁，哪位实验室有切片机的，能否帮忙做个切片？实验室没有切片机，实在悲剧。
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