关于Splinkerette PCR的一些疑惑

jiabiaohu

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测序单上一般有PCR引物测序的，一般有两个选项，PCR纯化产物（即你跑电泳后割胶得到的），另外还有一个PCR未纯化，这个你也可以直接送过去，当你注明之后，测序公司会给你纯化的，当然测序费用可能要高些~~~

jiabiaohu

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splinkerette  你好，看了你推荐的那篇文章，很详尽，有个问题想请教下，在这篇文章中，splinkerette 接头连接后，还有一步EcoRV酶切的过程，但是LZ的没有，当然分析来说两种方法都可以，但具体到结果上会有什么差别咯？

jiabiaohu

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' _# J- b+ r+ r) j( m
7 @- S* H/ t% B  Q0 O- ~; ~1 |+ Z) V我这个下游没有合适的酶切位点，所以方法可能和你的差不多咯~~~~ 能不能提供点详尽的资料（比如接头合成，具体实验步骤之类）咯~~~~虽然那篇文章很详尽，但还是怕出差错~~~另外，看到一篇protocol说Splinkerette PCR容易出非特异性带，不知道你的实验结果怎么样？
) ]! j) t* O0 s! U- t就等着这个结果毕业了，盼回复啊~~~~先谢过了。如果不建议的话，是否可以加QQ聊咯？我的QQ 348580917

jiabiaohu

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# s7 `, M- {, t0 G- r) f7 }, D
7 T% ^6 A1 ~. C# W9 J3 \" t3 m附件中是其他一些基于Splinkerette PCR 的改进方法~~ Isolation of Genomic Insertion Sites of Proviruses using Splinkerette-PCR based .doc (383.5 KB)

2011-3-17 12:23 上传

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jiabiaohu

回复 splinkerette 的帖子. b3 K) k2 o  |7 b' W0 B# Q
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合成的接头5端要加接头不？急~~~~谢谢·~

jiabiaohu

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, X/ C# K2 l% |) M' A9 y) H0 d# t0 L; @' m  F) z. C: e0 F4 x
呵呵，不好意思咯，打错了，问题是“合成的接头5端要不要磷酸化”，后来查到了，好像是说不用磷酸化的，对吗？

jiabiaohu

回复 splinkerette 的帖子5 R2 {- U+ B1 u8 J* e- u

( R2 Z" X! u% P6 y% K好的，谢谢咯~~