关于Splinkerette PCR的一些疑惑

jiabiaohu

回复 splinkerette 的帖子0 j4 F: q3 V( x$ {
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测序单上一般有PCR引物测序的，一般有两个选项，PCR纯化产物（即你跑电泳后割胶得到的），另外还有一个PCR未纯化，这个你也可以直接送过去，当你注明之后，测序公司会给你纯化的，当然测序费用可能要高些~~~

jiabiaohu

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+ C/ o0 H5 P& n9 i; L; X9 M; }- y  Q8 x6 I  r
splinkerette  你好，看了你推荐的那篇文章，很详尽，有个问题想请教下，在这篇文章中，splinkerette 接头连接后，还有一步EcoRV酶切的过程，但是LZ的没有，当然分析来说两种方法都可以，但具体到结果上会有什么差别咯？

jiabiaohu

回复 splinkerette 的帖子0 E, s) K; _/ n7 ^% j6 H
  M( ?6 [3 |, u; I
我这个下游没有合适的酶切位点，所以方法可能和你的差不多咯~~~~ 能不能提供点详尽的资料（比如接头合成，具体实验步骤之类）咯~~~~虽然那篇文章很详尽，但还是怕出差错~~~另外，看到一篇protocol说Splinkerette PCR容易出非特异性带，不知道你的实验结果怎么样？
& R# [1 x7 G. _2 b( x9 m就等着这个结果毕业了，盼回复啊~~~~先谢过了。如果不建议的话，是否可以加QQ聊咯？我的QQ 348580917

jiabiaohu

回复 jiabiaohu 的帖子) g! ?  L  Z3 r' l

' w: f  z. F' {; B7 F附件中是其他一些基于Splinkerette PCR 的改进方法~~ Isolation of Genomic Insertion Sites of Proviruses using Splinkerette-PCR based .doc (383.5 KB)

2011-3-17 12:23 上传

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jiabiaohu

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2 a2 F# f# a5 ~. @7 |合成的接头5端要加接头不？急~~~~谢谢·~

jiabiaohu

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% a) F# o# B9 ]呵呵，不好意思咯，打错了，问题是“合成的接头5端要不要磷酸化”，后来查到了，好像是说不用磷酸化的，对吗？

jiabiaohu

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/ N" i1 K6 @9 ~# S: R' F' ~1 w
2 g  G+ r$ \4 _% o- c) m好的，谢谢咯~~