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楼主: 钻石星辰
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[请教] 关于Splinkerette PCR的一些疑惑   [复制链接]

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楼主
发表于 2012-6-1 23:14 |显示全部帖子
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回复 钻石星辰 的帖子# v' _- Q; R0 u9 k1 m* L

8 l$ C) M) B6 h4 {PAGE胶纯化的效果要比HPLC的效果好呢!所以,肯定是没有问题的!
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沙发
发表于 2012-6-1 23:19 |显示全部帖子
回复 splinkerette 的帖子
5 Q/ j  z& ]6 Y
. @* U% e) k9 g& M切胶主要是为了让测序结果更好一些,因为在一个等级的片段在上机测序时可以更好地控制时间,因为目前高通量测序都是要做类似于PCR的过程,这个过程就像PCR一样,不同的片段长度需要不同的时间,这就是为什么要切胶的原因,同时,你切的不同长度范围的胶也会让最后测序结果实际长度有个评价的依据,比如,50-100bp范围如果测出500bp的带,那么结果肯定是不可靠的,可能是污染。这也是为什么用4%的胶来分离酶切产物的原因,可以让条带分的更好更细!利于切胶。我觉得测序这块你懂这些应该就可以了,剩下就给公司做吧!只是你需要注意切胶和电泳时尽量小心,避免污染,因为高通量测序是很怕污染的!
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