绵羊脐带间充质干细胞，无文献摸索-Ⅱ 细胞诱导分化鉴定

金戈

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to question1：并不是要细胞完全融合了才能做诱导分化。如果完全融合了才开始诱导的话，你的细胞坚持不了那么多天就会因为太密而脱落。一般70-80%融合就可以做诱导了。因为干细胞具有增殖和分化的潜能，是决定细胞增殖呢还是向其他方向分化，与细胞的环境有关。为什么细胞长满了要不断传代才能保持其干细胞的特性而不向成熟细胞分化的原因。向如上所示，我个人觉得细胞长的太密了。（谨供参考）
) F2 P7 d1 ?$ ]  Q( q7 F6 z0 D6 mto question2：油红"O"，示一种化学染料，能将组织或脂肪细胞染成红色。比较便宜，也比较好用。配好的油红O最好用滤纸过滤一下，去掉沉渣和杂质。
7 I1 H9 w- _$ l# C& }6 a' }to question3：碱性碱性磷酸酶钙钴法染色、钙茜素红染色都是鉴定成骨细胞的染色方法。两种做一种就可以了。我两者都做过。对比而言，钙茜素红染色比较简单，跟油红染色相似，步骤比较简单，固定和染色。而碱性碱性磷酸酶钙钴法染色比较复杂些，我不知道有没有现成的染液买，我当时是全部自己配置的，所以很麻烦，还有H2S，超级臭。。。。
/ S# U5 r' X4 u' Lto question4： 染色还好，只要固定好。固定的时候要注意操作，别等你固定完细胞已经都不见了，那就亏大发了。养细胞需要CO2培养箱，最好要有操净工作台。染色不需要什么仪器。1 B7 r6 Y, k8 k5 Q$ |- B: z" `
关于绵羊MSC，做的人可能比较少，但是这些方法都是通用的，不管是人的，鼠的等等。而且都是MSC细胞，所以特性也相近。所以可以参照其他物种的方法来做，没有问题的。
3 w; V7 N: c% v% c$ Y# I% |; F$ f另外，其实成脂诱导，脂肪细胞很特点很明显，其实没染色也能看出来了的。比较好做。
, _# Q: `$ Y# h- t+ V1 uGOD BLESS YOU!

金戈

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TO 1: 染液不需要无菌。: Q+ G- W: `7 z1 E0 o
TO2: 油红用一般的滤纸过滤就可以了。主要是去掉很多杂质，影响染色背景。
8 c* f, X. E( E4 S3 WTO3：固定液没过细胞就可以了。一般5min左右  K; Z1 `  _4 N4 {/ u+ y/ b0 Y
TO4：染色过程中，洗弃培养基，可以用DPBS或者PBS或者用生理盐水也可以，洗2次，然后固定。固定后，以及染色后洗，用生理盐水、蒸馏水什么都可以了。

金戈

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6 q& P# K) a. A) G* [% A$ r
这两天忙着没上网，配方在办公室。晚上给你。（但愿下午没忘记：））

金戈

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+ C2 s1 d+ A! m下午一上班就先看了自己的手册。呵呵
1 n4 B5 i& \3 c$ J配方是：0.01g茜素红+1ml 95%乙醇+9ml 1% NaOH
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