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本帖最后由 皮搋子 于 2011-2-18 21:14 编辑
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" B& R7 z$ t( Y% C9 n# O7 [* U写这个帖子一个是求助,另外一个是方便各位打算做诱导分化的各位同仁,有道是看万卷书不如听达人一句指点啊!
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' S" R0 E& ]6 g R2 L6 v; _在这里真诚的感谢坛子里面所有帮助我的人,同时真心的希望这些帖子中的达人的回复能帮助到做MSC培养的同行。0 N2 ?: y: P8 ] A1 d
, b& a# I8 X+ [5 {- r所以请版主帮忙,等待我的系列帖子发完之后能做个汇编,把出现的问题做个汇总,谢谢!
) o# S) L6 H' }3 n A" f5 m7 M" Y: r' C# G1 _- s
好,言归正传,自从昨天听取了各位达人的建议后,特别是“guosapphire”的建议相当中肯,做诱导分化是势在必行啊!也谢谢get0715的建议,我就决定做干细胞向骨骼和脂肪细胞的诱导分化了! ^1 i* D; v3 D, C- i$ ?
9 f! }- l1 M) @# X9 v9 J& ]& {说做咱就做,分瓶先!& j% B8 W$ `5 f* M; j) X
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取一个长满的175cm的瓶子,传代分成9个小瓶。(为啥分小瓶?省钱不是,大瓶子太贵了,20元一个呢,而且费血清费的要死),其中3个瓶子做阴性对照,3个瓶子做骨骼诱导,3个做脂肪诱导。. s& h6 g6 H1 Q) ^/ j* g+ R& T
/ r) f8 a! l; l. [3 P1 ~下面的部分还没有开始,正在计划中,现在万事不具备,细胞也没融合。。。
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因为我悲催的发现查到的文献中的好多东西不懂。。。但我会实时的进行报告进展。
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- U S2 i+ j4 e8 c问题1:为啥要细胞融合了才能做诱导分化?
- j1 E5 B( B, f: ~; d5 O答 案:因为加入诱导分化剂之后细胞会停止生长,而且会死掉相当一部分。之所以让细胞长满到融合的程度是为了多拉上几个炮灰,才能保证21天之后不全是坏蛋。(这个答案感谢我媳妇的教诲和指导), I6 E) F( H( l
至于融合成啥样才算好呢?看图!
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; k! Q- P! C* ~ A5 i/ ^$ \+ w; l( W% I& L2 |
0 }) C3 W* l7 Q& v问题2:啥是油红“O”染色?为啥我查的文献中都是做组织切片?苍天大地,那可是费老鼻子劲了!这玩意染的方便不?需要啥神器吗?1 s& p& h2 }3 `' G9 \
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问题3:啥是碱性磷酸酶钙钴法染色、钙茜素红染色?必须都做吗?
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4 v6 D+ X' E9 I+ N4 E7 z( o问题4:染这玩意简单不?我们这里刚开始养细胞,我需要什么仪器吗?那个倒置显微镜就不要讲了。
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/ c& T3 J7 ^9 u! n" p2 Q! j* \附:文献查到的方法,供大家参考指正。" c+ K! B. d* Z% p6 H
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向成骨细胞诱导分化:7 }8 x2 u$ M0 N! { o) K( q
以成骨诱导培养基培养(DMEM/F12培养基,100 mL/L FBS、10-8mol/L地塞米松、10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠和50 mg/L抗坏血酸)每3~4 d全量换液1次,培养至第4周时行碱性磷酸酶钙钴法染色、钙茜素红染色。$ r: d& S) i3 V) r5 i. i0 Z
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向脂肪细胞诱导分化:: {+ f. J) N) G F( J
以成脂肪诱导培养基培养(DMEM/F12培养基,10mL/L FBS、地塞米松1μmol/L、胰岛素5 u/mL、吲哚美辛0.5μmol/L),每3~4 d全量换液1次,培养至第21天时作油红“O”染色。& A" V. {+ ^' m- P# d1 G' _
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