斑马鱼胚胎显微注射（QT格式）

珊野love

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9 ]* f! w3 |" F: H' I6 Y. i+ v
/ h' i, h% k* n! I* Z+ o5 M楼主能不能发给我一份啊，等级太低下不了，谢谢了，邮箱taoran0227@163.com

ying

回复 珊野love 的帖子6 E' G6 q( U1 ~) e( [7 q
; |0 }3 I/ U( q3 N- {
我一般打1-2nL.   注射针我们是在鱼房做的，他们有个拉针的机器，我不知道他们怎么设置的参数。针也有不同类型的，你是要打算自己买自己手工拉吗？
/ U) I8 e0 U: x: |! b% C$ i7 r6 }我打动物极的方法是，先把鱼卵在琼脂板上（那种特制的带有凹槽的那种，你知道的）排好，然后用个拉过的枪头（火烧一下，化了之后一拉，拉成不粗不细的一根丝丝）一个一个拨，拨得动物极朝上。然后再打的。之所以要用拉过的枪头来拨，是因为比较软不容易刺穿卵，又比较长容易操控。
" ~  k+ E0 v% ^" n" p% T话说，你如果不是做转基因鱼，而是仅仅是打morpholino或者合成的mRNA或者类似的小分子，是不必要打动物极的，任何一个角度打了，尽量往卵的正中间插，打了就行了。& @8 n' {  x/ P/ `2 k: ]9 K. w
在卵产出后10-20分钟，动物极一侧是透明的，另一侧是卵黄，很容易看见的。如果看不见，稍微把卵拨一下换个角度就可以看见。一般正常情况下，动物极是自然朝上的，所以拨一下就能看见。在45分钟之后，动物极就开始分裂了，就更容易找到了。! H0 W& o' d# @2 J* u

ying

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# j6 Q3 f6 W; V* L2 y- x6 e
注射mRNA一般可以打400-800pg每个卵，注射morpholino一般是4ng-8ng。多了会有非特异性的表型。

珊野love

非常谢谢，我是做转基因的，第一批检测结果就是没有转进去，当时因为找不到动物极就直接扎到卵黄中间的位置了，因为放在培养皿上没有水，卵还很小，所以看不到动物极，你说的琼脂糖的那个孔是胶孔还是有特殊的专门显微注射的那种啊~~

珊野love

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) J8 F8 C6 M8 _7 X) |8 y注射针我们也是用拉针仪拉的，里面也有好多程序，但是不知道哪个好，有的特别细都打不出来液体~~

ying

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# {: N7 C3 S% v3 ~$ z8 a5 i' p6 v* w, T
话说，你是用的体视显微镜操作么？体视显微镜下面看，是一定可以看到的啊。卵再小，倍数调高了也是很大很大的啊。不用体视显微镜估计没人能注射到动物极吧～! P7 m4 H# @' |3 S# K, S, r$ g
琼脂糖板子是有个专门的模具，模具扣到琼脂糖上面，凝固之后就成了几排槽子了。你是上海的吗？是的话我的可以借你先用。8 \9 J6 o) \' q( s
我也不知道拉针是用什么程序。你可以询问一下清华（？）的孟安民组或者神经所的杜久林组，或者生化所的李逸平组，他们的程序是怎么设置的。你也可以按照各种程序都试试，然后选一个好用的嘛。

珊野love

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1 P8 c" `5 b+ h9 T0 h
; C3 e2 q9 P4 F: ]: L- ~+ D9 a( v非常感谢，我们用的就是专门显微注射的显微镜，我不知道是不是体式的，老师说找不到动物极，因为培养皿中没有谁，没法漂浮。我原来在上海那边，那边有好多同学，不过现在来哈尔滨啦，嘿嘿，离你们好远呀~~

lizzychen

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! k" f  c( y1 V* I6 M( S
在做这个，但是级别低了下载不了，麻烦LZ给我发一份吧，谢谢哈！174499907@qq.com

lizzychen

楼主，你好，想问下你一般每个卵打多少量？定量你是用mineral oil测量液滴的直径么？期待回复，谢谢！

runsong

回复 jdrkna 的帖子7 n/ w+ ^9 l+ `* _1 T6 U

  N. c' S" F$ l我这里网速太慢了。请传一份
/ J  X5 [6 B; W  I# k& m8 a$ w' i5595758@163.com