关于蓝白斑筛选的遇到的问题

heiguzi1988

我用的是DH5α甘油菌和PUC19做蓝白斑筛选，做了几次实验，（培养基是LB固体培养基，内含氨苄抗生素，等凝固之后在表面涂上X-gal和IPTG，涂好后且在一天内使用，不会久存），发现克隆细胞没有蓝斑只有白班，我开始以为是连接效率很高以致无自连质粒菌，但是后来拿空质粒转化这个甘油菌，居然也只有白斑没有蓝斑。放在4度冰箱显色几个小时没有变化。这就很奇怪了，按道理来说应该全部是蓝斑才是。请问到底哪里出了问题呢？是实验设计不对么？？
& t' T! l% k: e& D0 l; Q7 @* M
/ ]$ E! @4 m0 t% m) M最后补充一点，那个试剂应该是没有问题的。我新买的，尤其是质粒从不同公司买了两次新的。2 `" i! Z& a6 s

ambassador

* p1 n0 q9 O, k3 ]

: o6 {) t* r, X1 u; m5 O这个问题估计没有人能解决了！我这里有一个资料，在26页，你看看吧~！1 w" h5 O0 |" X
分子克隆-91页.pdf (1.49 MB, 售价: 包包 2 )

2011-2-27 22:00 上传

请用IE浏览器下载
阅读权限: 20
售价: 包包 2  [记录]  [购买]
下载积分: 威望 -2 , 包包 -5

5 C( C3 R; q3 V! M
1 C/ ?) j% I" t: n; n
* G8 t5 d2 ~9 L8 V9 w自己操作是不是有问题？找个做微生物的高手见习一下你的操作，这个比较重要，一个人自己在那摸索，很可能犯了一些不易察觉的错误，自己没发现的。

kim2010

可能是X-gal和IPTG见光分解了，就不会显蓝色。一般均匀涂布好二者后，放置在2小时以内使用，还得避光。