关于蓝白斑筛选的遇到的问题

heiguzi1988

我用的是DH5α甘油菌和PUC19做蓝白斑筛选，做了几次实验，（培养基是LB固体培养基，内含氨苄抗生素，等凝固之后在表面涂上X-gal和IPTG，涂好后且在一天内使用，不会久存），发现克隆细胞没有蓝斑只有白班，我开始以为是连接效率很高以致无自连质粒菌，但是后来拿空质粒转化这个甘油菌，居然也只有白斑没有蓝斑。放在4度冰箱显色几个小时没有变化。这就很奇怪了，按道理来说应该全部是蓝斑才是。请问到底哪里出了问题呢？是实验设计不对么？？
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最后补充一点，那个试剂应该是没有问题的。我新买的，尤其是质粒从不同公司买了两次新的。
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ambassador

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9 n* R6 B: [1 C4 z! M# y) Z1 y2 O这个问题估计没有人能解决了！我这里有一个资料，在26页，你看看吧~！
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2011-2-27 22:00 上传

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0 n! R' R" q+ f/ F' w1 _: N自己操作是不是有问题？找个做微生物的高手见习一下你的操作，这个比较重要，一个人自己在那摸索，很可能犯了一些不易察觉的错误，自己没发现的。

kim2010

可能是X-gal和IPTG见光分解了，就不会显蓝色。一般均匀涂布好二者后，放置在2小时以内使用，还得避光。