MCF-7怎么都漂起来了？

cookiezhang

先上图
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各位大侠能给我看看这是怎么回事吗？: F; R) g. i) O! D5 `
六天前买的细胞，刚开始用的培养基是买来时那瓶细胞中充满的那些培养基，细胞长的挺快的，一传三第二天就长满了。可是昨天也就是第五天就发现细胞长的速度慢下来了，而且还漂了一些细胞，但是不多。今天情况就更严重了，细胞没怎么长，而且漂了很多，瓶壁上的细胞形态也不如买来时好了，可能图中看不到飘着的细胞，倒置显微镜下可以看到很多。( F' m6 J( h/ I" C
培养基也是从公司买的，和细胞之前在公司用的一样的，但是血清第四天部分瓶细胞用的是原来的，部分换成四季青的了。
8 @3 w7 I/ G0 y8 H- i第四天的时候我们也做了一下对比：1、用带回来的完全培养基，其中含的是进口血清。2、相同的培养基加上国产的血清。可以感觉到用国产的血清状态稍差一点，但是没有那么明显。  H4 A8 i/ N$ C1 R6 z
是血清的原因吗？其他还有什么可能啊？这图能看出点什么吗？
% }+ _3 p, _4 B4 p' e: R; Z不知道我讲的够不够清楚。

cookiezhang

自己先顶一个，大家帮帮忙啊！！！

ditiger

1、MCF-7是一个很好养的细胞，LZ不要泄气，但是如果是刚刚买回来需要保种的话，建议LZ先用公司里完全一样的培养基，扩增到可以先冻存3-5支，然后再试一下其他的培养基。4 o( {- I8 G/ ?5 R% {
2、另外，胰酶消化时，要随时在显微镜下观察细胞变化，待细胞变圆，立刻终止消化，加入完全培养基，轻轻吹打均匀。。。不要太暴力，呵呵。
5 [" E2 n0 @  y( f7 ^* A5 ]3、如果是几天之内的话，可以向公司再要一瓶的，同时再买点他的培养基，应该可以的。。。

深海寂寞鱼

回复 cookiezhang 的帖子5 P6 z0 n/ G' m" e
7 m5 |7 M1 y; z& H" p6 f
你添加胰岛素了没？
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标准培养方法中要加入胰岛素。你可以上ATCC查查。6 f5 c- O1 @( d
; m9 A) |+ X% h& ?& t% r0 Y
MCF-7不是很好养。
" l* ~- @- d# g% H5 F当然我身边也有人养的特别好，生长的很快，不加胰岛素，甚至用RPMI 1640养。$ f1 A% E5 V' O7 K  W) O2 ]: z
但是我看过那些细胞的形态，和刚买回来的是完全不同的。& `0 b2 s, c# G; z2 l& p

' O! {3 s) L- j# X' I  {/ c5 t/ O1 T1 j: R  S% J3 Y

ayeqiu

估计是换了血清印象了细胞贴壁情况。但是我看你第二章图片，细胞周围有很多小的透亮的圆点，怀疑你的细胞已经被污染了。建议将细胞拿出培养箱，对着灯看看培养基是否变浑浊，然后再高倍显微镜下观察一下。

susuloveq

我觉得你的第一张图片的细胞有问题，培养基的颜色有没有变？？

cookiezhang

今天看细胞都死光了，真郁闷。真不知道到底什么原因，污染了，不适应血清。
7 j: D$ M+ g7 D  @% y1 E9 |粗看培养基还是清亮的，但是仔细看得话，可以看到很多细小的比灰尘还小的颗粒，难道是真菌感染，真菌的话会这么快死？
* M9 U" F- N& W5 A) O大家实验室的培养箱，多久消毒一次啊？紫外线吗？  E- X: n. M5 ?$ l7 A4 V" }4 k3 N
冻的几瓶也用的国产血清，不知道复苏后是什么样子呢？: L$ i" g' h& ]  z4 ?
新买来的细胞大家都自己换培养基或者血清吗？还是和细胞库用的相同的东西？怎么样换才能让细胞适应过来啊？
4 q; l) z, p: P# |

cookiezhang

回复 深海寂寞鱼 的帖子
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没有添加胰岛素，公司说他们都不加，就没加了。

ayeqiu

- P; @' y1 i' Y/ k) |4 ]1 [- O
1 W7 M6 ^! s# T回复 cookiezhang 的帖子
, A* R( Q# x6 X4 w/ j( E% s5 E, _6 R4 P9 _* X! w( V$ ?
培养基看起来是透亮的，估摸着是真菌污染了，你可以涂板子鉴定一下。8 B" K1 o) j) `! o8 B. K
我们实验室的培养箱在正常情况下，每个人固定用稀释的次氯酸钠和75%酒精消毒，其中培养箱中的水，每个星期都会更换。
& r* _$ a  d, y2 |9 {+ d3 O5 I! |而且，要是你更换血清的话，最好是新复苏一株细胞，配制一瓶新的培养基，血清含量和原来的培养基用量一致。

shuishanglingzi

我们的培养箱半个月用75%酒精消毒一次，再紫外30min。培养箱中的水也是半个月更换一次，用的是灭菌水。: s; b. w2 \2 k6 l! s
你可以做个实验比较一下，一部分新买来的细胞用之前公司用的培养基和血清，一部分用国产的血清。培养一段时间看看细胞有什么变化。