MCF-7怎么都漂起来了？

cookiezhang

先上图
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各位大侠能给我看看这是怎么回事吗？; b, @) F% F0 {3 Y+ ?: m
六天前买的细胞，刚开始用的培养基是买来时那瓶细胞中充满的那些培养基，细胞长的挺快的，一传三第二天就长满了。可是昨天也就是第五天就发现细胞长的速度慢下来了，而且还漂了一些细胞，但是不多。今天情况就更严重了，细胞没怎么长，而且漂了很多，瓶壁上的细胞形态也不如买来时好了，可能图中看不到飘着的细胞，倒置显微镜下可以看到很多。
0 G# _: k( k+ j4 W# E4 @& m9 k) H培养基也是从公司买的，和细胞之前在公司用的一样的，但是血清第四天部分瓶细胞用的是原来的，部分换成四季青的了。+ u1 ~" O0 ^0 g9 B- n
第四天的时候我们也做了一下对比：1、用带回来的完全培养基，其中含的是进口血清。2、相同的培养基加上国产的血清。可以感觉到用国产的血清状态稍差一点，但是没有那么明显。
+ ]% l2 y  s% o3 p3 U0 }$ a: x# z是血清的原因吗？其他还有什么可能啊？这图能看出点什么吗？
" y: J% c# ]9 r( ~- X不知道我讲的够不够清楚。

cookiezhang

自己先顶一个，大家帮帮忙啊！！！

ditiger

1、MCF-7是一个很好养的细胞，LZ不要泄气，但是如果是刚刚买回来需要保种的话，建议LZ先用公司里完全一样的培养基，扩增到可以先冻存3-5支，然后再试一下其他的培养基。
, c# s3 v. T: f4 R: E( p2 A2、另外，胰酶消化时，要随时在显微镜下观察细胞变化，待细胞变圆，立刻终止消化，加入完全培养基，轻轻吹打均匀。。。不要太暴力，呵呵。
! z0 b. v7 ^- o0 R  S) L6 i! X& w. X3、如果是几天之内的话，可以向公司再要一瓶的，同时再买点他的培养基，应该可以的。。。

深海寂寞鱼

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& I5 X6 j+ q( {9 X( \' A你添加胰岛素了没？6 p, s  n9 P6 o9 s0 `; c% q

$ q- Y# J7 [) b; E* C标准培养方法中要加入胰岛素。你可以上ATCC查查。
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MCF-7不是很好养。
3 T5 ]7 w; f8 L) m当然我身边也有人养的特别好，生长的很快，不加胰岛素，甚至用RPMI 1640养。: j( U1 ?- s% `
但是我看过那些细胞的形态，和刚买回来的是完全不同的。9 c+ T8 z# S* b: S. {

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ayeqiu

估计是换了血清印象了细胞贴壁情况。但是我看你第二章图片，细胞周围有很多小的透亮的圆点，怀疑你的细胞已经被污染了。建议将细胞拿出培养箱，对着灯看看培养基是否变浑浊，然后再高倍显微镜下观察一下。

susuloveq

我觉得你的第一张图片的细胞有问题，培养基的颜色有没有变？？

cookiezhang

今天看细胞都死光了，真郁闷。真不知道到底什么原因，污染了，不适应血清。; h$ m" g3 V! q2 Q0 d  V8 E  u
粗看培养基还是清亮的，但是仔细看得话，可以看到很多细小的比灰尘还小的颗粒，难道是真菌感染，真菌的话会这么快死？
0 \* ^1 v# D  R9 Y6 o大家实验室的培养箱，多久消毒一次啊？紫外线吗？0 s/ g! g- Q' J' V# `/ w7 A7 k/ H
冻的几瓶也用的国产血清，不知道复苏后是什么样子呢？/ U! k; d5 G4 x2 Q+ {
新买来的细胞大家都自己换培养基或者血清吗？还是和细胞库用的相同的东西？怎么样换才能让细胞适应过来啊？  F! d: L, Y( v. s0 G. B

cookiezhang

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% S+ y" ]( f! @6 w0 M没有添加胰岛素，公司说他们都不加，就没加了。

ayeqiu

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回复 cookiezhang 的帖子$ G4 N  c# P8 j6 _6 c" t
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培养基看起来是透亮的，估摸着是真菌污染了，你可以涂板子鉴定一下。- O( q9 W7 [9 x. k, e/ \$ `7 ^& ~
我们实验室的培养箱在正常情况下，每个人固定用稀释的次氯酸钠和75%酒精消毒，其中培养箱中的水，每个星期都会更换。+ W2 D0 K, @! a  L% Y0 r! Y
而且，要是你更换血清的话，最好是新复苏一株细胞，配制一瓶新的培养基，血清含量和原来的培养基用量一致。

shuishanglingzi

我们的培养箱半个月用75%酒精消毒一次，再紫外30min。培养箱中的水也是半个月更换一次，用的是灭菌水。6 K! _2 W, d. i! o% n2 U8 s
你可以做个实验比较一下，一部分新买来的细胞用之前公司用的培养基和血清，一部分用国产的血清。培养一段时间看看细胞有什么变化。