brdu阳性细胞

angelyannan

请问谁能详细的描述一下brdu阳性细胞的观察标准？（包括组织切片的和细胞培养的）另外brdu阳性细胞计数的方法（体外培养的细胞）？最好提供相关文献，谢谢。

luoziwei

关注ing

angelyannan

怎么没有人理睬我的问题，是太简单了么？我之前就是观察brdu的荧光显色是否是在细胞核的位置以及荧光显色点的形状大小。若荧光显色点与DAPI显色的位置、形状重合或者几乎重合，我就认定为brdu阳性细胞。不知道这种判断标准是否可行？很想知道更严格详细的判断标准。

hanbing

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8 B. K- ]! Z5 {& l

2011-3-8 00:17 上传

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Brdu阳性细胞

joeandanna

细胞增殖的检验方法：BrdU标记法   # X$ P# d  a( Y  C, o4 H) j; f
  
) V3 X4 x5 l0 |* q% M1、细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0 期。
5 m9 O: I$ ]4 `1 |
4 i: o+ y/ j/ @/ Q' P* a" }' X2、终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。7 a! F( q2 {5 w. ?* B
1 E! ?% H- S& \3 f% ~* a! U
3、弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。
) a$ t. B" c1 \' I9 V# ~/ H$ p' `, M: D, I5 b
4、甲醇/醋酸固定10min。
& L( N" K  D5 f) ]7 f5 p, l8 l- f% |9 }0 y6 K  Z
5、经固定的玻片空气干燥，0.3％H2 O2 -甲醇30min灭活内源性氧化酶。. Y$ O2 i8 O. t4 X( C

+ j% \# K4 ]9 m0 W" o  E$ u6、5％正常兔血清封闭。
( o3 u. n* {, N: W* y/ @; Y- {5 \6 z" W' F0 ]6 I+ B
7、甲酰胺100℃，5min变性核酸。
2 Y/ X7 S* W& h( D" i5 B4 j( Q8 W; p2 [
8、冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。
' A' L! O/ a4 G/ u9 G
# Q! d4 U: B' L" V. f2 I! \9、按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。

joeandanna

等着发包子。争取到50威望。

angelyannan

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) m+ |- B' V! j! F+ y" l/ P( Q" w$ Y# s/ H. z
图片很清晰，谢谢

angelyannan

回复 joeandanna 的帖子2 l7 F: x# ?- q* C; ?

% @) q8 |8 D( U) V学习了，谢谢。

libingnan11

认真学习，谢谢

jialan

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& m. o2 l1 F/ i4 k6 t, m. [6 U' I, l呵呵，有用，多谢