brdu阳性细胞

angelyannan

请问谁能详细的描述一下brdu阳性细胞的观察标准？（包括组织切片的和细胞培养的）另外brdu阳性细胞计数的方法（体外培养的细胞）？最好提供相关文献，谢谢。

luoziwei

关注ing

angelyannan

怎么没有人理睬我的问题，是太简单了么？我之前就是观察brdu的荧光显色是否是在细胞核的位置以及荧光显色点的形状大小。若荧光显色点与DAPI显色的位置、形状重合或者几乎重合，我就认定为brdu阳性细胞。不知道这种判断标准是否可行？很想知道更严格详细的判断标准。

hanbing

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5 E& K0 q) t+ r1 q& q) L0 C
9 t3 ?& X: o$ e$ o. S

2011-3-8 00:17 上传

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Brdu阳性细胞

joeandanna

细胞增殖的检验方法：BrdU标记法   
! Q* {$ r# t( R+ ^5 ~  
) [/ }4 f5 @! D/ D) _4 ?2 f1、细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0 期。) D- {4 p' V1 t$ s: m1 }
7 ^; s4 u: k* K4 c2 [' p( g
2、终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。
* g( d! u3 \( s9 s. v% R9 Q1 F* k& T
3、弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。" u# h7 U1 S0 v# G& I) o+ d

1 \& C0 c# V9 ^4、甲醇/醋酸固定10min。
$ l: @8 L! T# O; t1 ?% L- a! Q; y
6 i6 Z6 M% e; S/ f/ g% ?5、经固定的玻片空气干燥，0.3％H2 O2 -甲醇30min灭活内源性氧化酶。( y9 {# x, k& h8 b/ l8 Q
7 G$ M# R/ R' o8 M$ U, `) S& j1 @- Q
6、5％正常兔血清封闭。7 G6 G# g2 _9 S* B. |; W/ a- o& }
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7、甲酰胺100℃，5min变性核酸。
! \- c" _# _: a, e. P& _
' V  n% `3 V4 Z  D8、冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。) ~+ j: C- n) }, R6 \# H
: X0 X* R. }1 l1 Y5 P' u/ O
9、按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。

joeandanna

等着发包子。争取到50威望。

angelyannan

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! v6 Q6 s) r  q, q9 W# l, p; f7 i3 t) s1 H* p, ]
图片很清晰，谢谢

angelyannan

回复 joeandanna 的帖子  p- ^5 h( a. W, K+ r" T
, T- C, r) I2 \) C4 ~* t
学习了，谢谢。

libingnan11

认真学习，谢谢

jialan

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+ g+ m! w( R) k% d8 K$ s+ |
5 v! m1 F  h7 C2 W4 y呵呵，有用，多谢