CSC冻存与复苏问题

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CSC冻存液不能含有FBS，不然肿瘤干细胞会分化的。1 X# I1 @7 O& T
我看其他人有用含15%DMSO的无血清培养基作为冻存液，他们说-80℃冰箱可以存数周，一般是-80℃过夜后转液氮。

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5 p! k3 k- n  |. m3 i( o, _4 }, Q冻存细胞不要直接到-80℃冰箱，最好4℃冰箱30min到1h。-20℃冰箱1到2h再转-80℃过夜，然后转液氮。

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我没做过，从网上看到别人是这么做的。他们是从原代培养神经球。如有不对的地方还望指正！
- v' U6 \! R: u, J摘录如下：
- m# b2 L+ z9 Y! U. ^“神经球的冻存和复苏 * E5 U( e5 H) S
1. 将含有神经球的培养液从24孔板移入15ml圆锥管。 2 Q: g# y8 M) Q7 F
2. 200g离心5min。 : e/ [. }! v6 Y) R& Z/ T
3. 弃上清，用10ml含15％DMSO的SFM（不含EGF 和FGF）重悬细胞。 / e# {0 u- n! n+ I4 U9 O9 D8 n
4. 用移液管轻轻混匀，分装1.5ml每管（聚丙烯冷冻管）。
4 m! X7 k, T+ b5 I% ]7 g& ?7 s, N5. －80°C冰箱过夜。【译者加：我们通常在－20°C冻1－2h再转－80°C】
% g& Z( ~* Y" h# U9 z% E' w6. 次日晨转移至液氮罐保存。
* z! u& N! S$ @# S0 q+ @提示：如果不能使用液氮，神经球可以在－80°C保存几周。活神经球数量会随－80°C存放时间延长而减少。 1 r- Y6 f* t( [6 k
7. 准备复苏神经球，将冷冻管从液氮中取出，在超净台内回复至室温。
3 k* z* X* Y# B9 S* z8. 将冷冻管内容物转入含有10ml SFM的15ml圆锥管中。 ' p+ {9 |) a* e& R& n; c5 s
9. 200g离心5min，弃上清。
7 \& l2 m' ^$ E1 x/ P% b* l10. 用4ml SFM轻轻混匀。
8 M; J) a: f. `; ?/ B$ R11. 按每孔0.5ml种8个孔（24孔板）， 37°C 95% air 5% CO2条件下培养。
! t" ?7 i2 w' x' e3 G# E提示：小神经球比大神经球（直径大于100um）更易复苏成活。在组织培养基中，神经球复苏成活率很低（小于20％）。建议每孔至少种50－100个神经球。通过提高冷冻神经球密度或在冷冻液中加入20％胎牛血清可提高复苏成活率。但要牢记胎牛血清可以诱导分化。 ”1 ]5 p, P7 @) x! N  R1 ~% W, I