western的marker转不上？

张也行

各位高手好... ...
+ w1 B* H: K7 I% ]: P2 U这两天做western的时候发现转膜的时候marker老是转不上，湿法转膜，新的缓冲液。加了5-6ul的marker，在胶上明显能看出来。目的蛋白最后能出来（上样20ug-40ug）。转膜100V，一个小时。
& p, X" K: v4 B. B  s) _会和滤纸有关吗？用了很多次了，但是目的蛋白好像没有问题。滤纸大小必须和胶的大小一致吗？比胶大会短路吗？

张也行

回复 jefferson 的帖子
5 _& ~1 s1 U! d5 H2 [$ I* Y, D7 r# Z, X1 h
谢谢你！ 我做的时候一般最边上的那个孔不用。用的是普通的marker
5 A/ P% G+ S- V. i问题的关键是，最大的那两条带还在胶上，下面的20-50KD的marker条带胶上没有，膜上没有，滤纸上也不明显。PAGE胶最下面的溴酚蓝转膜后在膜上也不明显。很诡异... ...

张也行

回复 aminhair 的帖子( M6 D+ ]% h; {& @! V* r1 P
! ?0 s( i7 |/ M1 s: V; U
谢谢，不过“使用低恒压长时间（12h）”好吗？时间太长对蛋白不好吧？小蛋白容易弥散啊... ...

张也行

回复 jefferson 的帖子, T- g! }8 V1 I! {4 z
2 `' a6 r% E. [, _0 j7 o* F
哈哈 谢谢你，我今天试一下... ...% C8 T1 g$ i1 @2 t5 l
有结果了再给你回复... ...

张也行

回复 jefferson 的帖子4 U+ G) }; g3 b' r4 H

. G: D# \2 Z! F& _" j9 m5 t5 L我上次说错了，我用的就是prestained marker，不用染的。呵呵... ...