ips细胞几天换液好，培养30代需要多长时间，谢谢！

manybit

ips细胞几天换液好，培养30代需要多长时间，谢谢！

葱葱

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6 m7 @) ]5 f2 ]/ a# C请问怎么彻底除掉焦虫呢？你有好的方法吗？

922922922

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" D9 O* i6 w+ a$ B6 v( E$ z
# M. g8 W' s" F, A你用PBS洗一下试试，如果还是虫子不断增多，那可能是黑胶虫污染了。最好弃掉不要了

Jonathan

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* K9 y: r+ s) C7 ]" D* d3 V( j) U( |' J
鼠ips，还必须做嵌合鼠。。。现在我不知道需不需要做成体小鼠发育，但是嵌合鼠是必须的

Jonathan

鼠的ips我做的很少。对于人ips，楼主还是参考我的意见吧。看见很多人回帖，很多都不知道是不是没经验。人ips的培养基，里面有一种很重要的生长因子，是bfgf。如果是用在feeder上面的话，我们通常会加4-10ng/ml，如果是买的mTeSR1或者E8，里面的浓度应该是100ng/ml。培养基是必须天天换的，因为bfgf的稳定时间是大概18个小时。如果超过18个小时，或者隔天换液，看起来细胞可能不会有什么变化，不过仔细做一些基因表达吧，会有不同。所以每天换液是必须的。
8 @! d) `" A/ Q" d& Y" q
1 a: G7 g! v! j) m9 t! l, _第二个问题，隔多少天传一代呢。对于很多人来说，克隆不分化，还没长满就不用传的观点是不对的。如果是用matrigel或者geltrex或者vitronectin作为matrix，通常80%-90%就必须传。传代的比例根据不同干细胞系的生长特性而定，从1/10到1/20不等。这样的话，保持4天或者5天传一代对于细胞来说是最好的。如果超过5天，matrix是没法坚持那么多天的。所以即使没有满，也必须传。

葱葱

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' h" z% {# ], [
& n# m2 r0 d4 n/ B$ S( S我养的细胞出现了污染，感觉好多小虫子！是突然一夜爆发的那种！

葱葱

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; Z9 N" T7 C+ Q  F9 s6 ~1 x$ ~8 }2 s. A8 n
最好每天换液，人一般是3-5天一代。请问你挑克隆时用的什么方法？

922922922

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% A. d4 w3 Y& e' x, u
$ _* V, M% z2 K& O0 X; b0 ]3 b我们的经验是如故接种密度不大，根据第二天培养液的颜色，前几天可以隔天换液，但是随着克隆增大，一般就一天换一次液了，真心觉得养这种细胞很烧钱。

Takano

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, U/ J. Q/ q; K  b% U& a科普很好，赞:D

573639471

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! ?( _" o4 I- ?2 }% d, m: c7 q/ ?* J
4 G8 H9 b" k9 c# K$ n$ S! \胚胎干细胞全能性的鉴定主要包括以下几个方面：
7 H. I# I) g/ B1 T        碱性磷酸酶活性检测
8 w& s* g9 s" V        干细胞表面marker的免疫染色检测6 }# T8 i  B4 `4 v- m; ?; D! L
        干性因子的去甲基化分析  H% b6 {: l" T6 P/ u8 T& `+ H2 h# I9 |
        干细胞内源基因的表达分析7 B' r$ K1 v$ t, {  w
        端粒酶活性检测. x) K6 d+ n  N2 t0 _0 L( {: ~5 h
        核型检测
# B- _7 ^: E. ]. F        拟胚体形成
% r7 X+ n9 r! O        畸胎瘤形成实验
! O, j; e1 x8 l至于表面Marker，人和鼠的ips是不同的，但是OCT4、SOX2、Nanog都是要检测的。人还要检测SSEA-3和4，TRA-1-81，TRA-1-60；鼠还要SSEA-1
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