ips细胞几天换液好，培养30代需要多长时间，谢谢！

Jonathan

鼠的ips我做的很少。对于人ips，楼主还是参考我的意见吧。看见很多人回帖，很多都不知道是不是没经验。人ips的培养基，里面有一种很重要的生长因子，是bfgf。如果是用在feeder上面的话，我们通常会加4-10ng/ml，如果是买的mTeSR1或者E8，里面的浓度应该是100ng/ml。培养基是必须天天换的，因为bfgf的稳定时间是大概18个小时。如果超过18个小时，或者隔天换液，看起来细胞可能不会有什么变化，不过仔细做一些基因表达吧，会有不同。所以每天换液是必须的。
+ E3 t1 r( N1 B2 B6 ~
3 w1 F+ Z4 D+ K3 j: A第二个问题，隔多少天传一代呢。对于很多人来说，克隆不分化，还没长满就不用传的观点是不对的。如果是用matrigel或者geltrex或者vitronectin作为matrix，通常80%-90%就必须传。传代的比例根据不同干细胞系的生长特性而定，从1/10到1/20不等。这样的话，保持4天或者5天传一代对于细胞来说是最好的。如果超过5天，matrix是没法坚持那么多天的。所以即使没有满，也必须传。

Jonathan

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! o0 Q/ p) z' ~1 t2 W2 ~鼠ips，还必须做嵌合鼠。。。现在我不知道需不需要做成体小鼠发育，但是嵌合鼠是必须的