MSC细胞是否存在不对称分裂？

nanocellmatrix

% v0 W, E$ z9 l# A# }& s
% C, B8 u9 J0 u: v! X6 ~+ W最近，我筛选到一种药物，体外实验发现药物处理后，MSC难以向成骨细胞分化。2 _/ P8 a3 ^8 M
我的背景是化学生物学，干细胞尤其MSC分裂和分化信号通路知识很欠缺，希望得到大家指点和帮助。+ q3 e$ ?" a( h
实验设计如下；4 Y! u4 l2 d- k( ]8 x
    1）提前用药物处理MSC细胞 3天或7天
, w2 F; h, Y  _; Q& E1 |/ F. ]     2）然后撤出药物；* V+ N/ @2 O/ w9 ?
    3）加入成骨诱导培养基（OS）诱导分化21day，
/ r/ ^/ D. \9 W5 ^结果： 药物能明显抑制MSC分化。ALP活力低；矿化结节数目是正常诱导组的10%；
& F& j+ ^! t8 {0 q; k2 _9 ]: i% G- x. ^- L: i
现在对下一步实验很迷惑，向战友请教MSC分化和细胞分裂的问题。
4 T: c, X9 v1 q  K' ?) e    基于这一现象，我得出的结论很可能是药物抑制了MSC的成骨分化能力。0 f) {5 p! N" Q/ s- L
请问：8 C/ `: f* O8 l2 `
1）MSC向成骨分化过程中，细胞是否仍然分裂？
; c- g/ }% L' Y% {. ^2）如果存在分裂现象，是对称分裂还是不对称分裂？分裂后细胞为MSC还是成骨祖细胞？. x( t) l! ^# g/ I" M8 H
3）如果MSC不对称分裂受到抑制，是不是就难以分化？
9 {  U( F; h6 q$ L0 V4）请问大家是否看到MSC不对称分裂的报道和综述？请不吝赐教。MSC不对称分裂是否存在体外模型？
! P# O1 `* U8 l4 `8 t5）如果药物处理后，MSC向成骨分化被抑制。那么这种发现有科学意义吗？那么这个现象能从其他方面去解释吗？
$ S8 c- [+ u  v3 B: }    请畅所欲言。也可email联系：nanostemcell@yahoo.com.cn

stemcell8

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- ]9 M) S- ~& A- C3 R
8 O4 F4 @( B  j- ~  ^) O: j6 q" u以前看走近科学，说有个人不能受伤，受伤就疯张骨头，最后骨头让她不能运动。能抑制就牛了 呵呵

nanocellmatrix

恩，非常感谢tpwang 站友的精彩点评。9 o5 u, E- f5 I! t) I# \

tpwang

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8 D7 K9 O# u+ H- Q
Two Cents:# n- q1 X* m% j$ V' r* _0 h

6 Y  h! ?6 k. V7 l: P' S1）理论上体内MSC分化过程中，应该有分裂（不对称），以维持MSC状态的同时提供分化的靶细胞或前体细胞。这个过程理论上应该与niche有关。, C2 A, u" [) ]; o6 Z* G1 ~. A
2）对称分裂两种可能：都是干细胞，都不是干细胞；不对称分裂两种可能：一个干细胞，一个非干细胞。. g" f1 i; g. B7 B3 F& e
3）干细胞不对称分裂受抑制后，应该对自我更新与分化都有影响吧。! S. c8 H" h: |
4）不对称分裂的例子多来自生殖细胞、神经干细胞、皮肤干细胞等，间充质的报道很少见，体外模型也没见过。不过，假设要观察体外不对称分裂，需要设法找到某个条件，设立这个条件的有无两种情况的对比实验，争取观察到一个能维持一定数量间充质的同时产生分化细胞（不对称分裂），另一个多为分化细胞（对成分裂）。然后可以推断这个条件是不对称分裂的重要因素。3 R0 X, f7 R& x5 T. t' f
5）药物处理抑制MSC向成骨细胞分化的现象如果证实，科学意义不好说，临床意义除非是找到成骨细胞大量增生的病理状态，然后你可以说我有办法抑制这种病理增生。间充质干细胞虽然可以有不少体内组织修复功能，但也参与一些病理状态，如器官纤维化。假定这可以是个思路。好像有间充质向成肌纤维细胞分化的研究，大概可以参考。
. S- m" b7 M1 A) V1 @8 ]% L, a' D9 I* m- c7 g& P
没有文献参考，纯属随想，仅供参考。

nanocellmatrix

诱导剂配方：
" H, e! E' u, q3 g7 u地塞米松 0.1 uM, b-甘油磷酸钠 20 mM，维生素C 50 ug/ml。诱导21day
  x$ q3 h2 z. o6 Z4 ]# l8 T
# l, F9 @7 g, b; J2 h3 u5 b染料：茜素红（1%）溶于纯水中，pH 4.1。
7 C- {& Z8 m0 _7 J7 \6 b* _1，细胞用多聚甲醛（4%）固定，至少1h，可以放置2个月；+ C9 I9 T; P6 b# G) {
2，细胞用PBS洗涤三次，纯水洗涤3次，每次2min；8 Z: J$ v1 ^# A1 A( N6 s6 ~
3，六孔板每孔加入2ml染料，染色20min，放于摇床上；
9 [5 k$ Q7 L7 o, ~) f& U8 D4，丢弃染料；- G+ b/ {( L6 \( ?4 X0 ~' s
5，纯水洗涤5次，每次3min；
0 [% b# @5 S! {; _* ]! M6，显微镜下观察。
$ A" {' m3 W4 b% S; ?/ E+ x
2 n) L, D/ x' f

stemcell8

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- Y+ R' {" G# W3 T; M  s
感觉你的图片很漂亮 赞一个

stemcell8

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: k& e1 a" V! C! W) r: d8 {0 U- J- q4 P$ \; S: Y8 y4 X6 t. p
看样子效果比较明显，具体说明什么呢？我想应该结合临床或疾病模型，对那些不应该成骨的位置起抑制作用吧，或是直接发一篇体外抑制成骨文章，做几个成骨基因的检测，证明在基因水平和成钙水平上都有抑制作用，就大功告成了吧！不是很懂相关东西 对骨诱导和染色步骤很感兴趣，请发一个Protocal给我好吗谢谢 我的邮箱jiweicust@163.com

nanocellmatrix

$ r  S2 W$ S  v
2 q+ k8 `% N2 Y2 ?本实验采用的三组样品，先上传图片。% Q) C( `& F% b- G
对照（诱导剂）；药物1（强烈抑制分化）；药物2（部分抑制分化）。0 j5 N* a: M( r9 d/ P' Z6 ^

$ S% U7 n2 Y( |: |4 J药物1和2对MSC无明显细胞毒性，但是诱导剂加入后两种细胞形态明显差异。
6 p4 @' g$ o8 y/ \; C0 @9 n/ m7 S. m. R
$ v/ i. E% D2 X6 f3 V还要向大家请教几个问题：: \* J: P: y7 o' u- U8 g! C
1）不知道能不能从中看到什么？是否对细胞骨架有影响？
# V; g8 [4 z. v0 A2）成骨祖细胞和MSC是否有特异marker？
- |/ K8 Q1 {+ ]- H/ }. |3）如果筛选到成骨分化抑制剂，对临床和科研是否有意义？

nanocellmatrix

那么抑制干细胞成骨分化有没有研究意义？作为实验研究的抑制剂?

金戈

应该是存在的。不对称分裂和对称分裂是干细胞的特性。