MSC细胞是否存在不对称分裂？

nanocellmatrix

/ u: o) T3 p% B& e- `+ l
" c" e- Z! [+ j) I& @# J& C最近，我筛选到一种药物，体外实验发现药物处理后，MSC难以向成骨细胞分化。0 c( M* m: d  u3 F& |' n" ^2 B
我的背景是化学生物学，干细胞尤其MSC分裂和分化信号通路知识很欠缺，希望得到大家指点和帮助。- H: A8 u7 [; [9 l
实验设计如下；' o" Z/ j: w6 q. t  p2 B! M& q
    1）提前用药物处理MSC细胞 3天或7天. Q: M/ `% [9 h2 F# C) X
     2）然后撤出药物；4 x( p$ B* u* z3 r4 H
    3）加入成骨诱导培养基（OS）诱导分化21day，
7 |" S6 z4 e2 r! d: b结果： 药物能明显抑制MSC分化。ALP活力低；矿化结节数目是正常诱导组的10%；" S7 Z; ?& @" z# K) f: ]
& b- H4 ~. C: g/ t$ v9 g1 w  r0 r
现在对下一步实验很迷惑，向战友请教MSC分化和细胞分裂的问题。4 x; g3 J: n5 r  W$ k- D
    基于这一现象，我得出的结论很可能是药物抑制了MSC的成骨分化能力。4 {# a" P, O& X( ?6 Z' J
请问：
3 Q' B& l6 o. h# H3 |) i& x1）MSC向成骨分化过程中，细胞是否仍然分裂？8 o  e5 V, R3 w) Z; Z' c
2）如果存在分裂现象，是对称分裂还是不对称分裂？分裂后细胞为MSC还是成骨祖细胞？1 u" e; V6 e3 V; s: p4 B3 [
3）如果MSC不对称分裂受到抑制，是不是就难以分化？
1 q# Q; _* @+ L8 A2 c( A4）请问大家是否看到MSC不对称分裂的报道和综述？请不吝赐教。MSC不对称分裂是否存在体外模型？
; [" C' c) C+ X- j5）如果药物处理后，MSC向成骨分化被抑制。那么这种发现有科学意义吗？那么这个现象能从其他方面去解释吗？
- y0 }6 F" F, k* A: ?; [. {9 b0 A+ o    请畅所欲言。也可email联系：nanostemcell@yahoo.com.cn

aminhair

不存在。

nanocellmatrix

请问为什么不存在？

金戈

应该是存在的。不对称分裂和对称分裂是干细胞的特性。

nanocellmatrix

那么抑制干细胞成骨分化有没有研究意义？作为实验研究的抑制剂?

nanocellmatrix

- `2 P6 A" m8 \# ?

$ \- \' u% s' L1 Z/ k5 [& H* p, h本实验采用的三组样品，先上传图片。
) k9 }6 a& b7 o  c; a3 h0 U! Y对照（诱导剂）；药物1（强烈抑制分化）；药物2（部分抑制分化）。
. a; D- E! G6 S# N, {( [( I: e4 r+ n% S- ~* D
药物1和2对MSC无明显细胞毒性，但是诱导剂加入后两种细胞形态明显差异。* Q# \! e* b) T: Q  }

4 R! H, ?9 R9 M还要向大家请教几个问题：( i* P" t/ u7 T2 I) G
1）不知道能不能从中看到什么？是否对细胞骨架有影响？- z4 L* A2 s' {  M  B
2）成骨祖细胞和MSC是否有特异marker？
) s+ B% N) h' m: A. B3）如果筛选到成骨分化抑制剂，对临床和科研是否有意义？

stemcell8

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/ B0 d* \- u: O2 |: B7 _看样子效果比较明显，具体说明什么呢？我想应该结合临床或疾病模型，对那些不应该成骨的位置起抑制作用吧，或是直接发一篇体外抑制成骨文章，做几个成骨基因的检测，证明在基因水平和成钙水平上都有抑制作用，就大功告成了吧！不是很懂相关东西 对骨诱导和染色步骤很感兴趣，请发一个Protocal给我好吗谢谢 我的邮箱jiweicust@163.com

stemcell8

回复 nanocellmatrix 的帖子$ Z/ B% R' K' k  [! V6 d

  O, F: ^7 I4 x+ B1 M  F: J感觉你的图片很漂亮 赞一个

nanocellmatrix

诱导剂配方：
  T  G1 O. q7 j1 e4 l1 L* Y5 o地塞米松 0.1 uM, b-甘油磷酸钠 20 mM，维生素C 50 ug/ml。诱导21day
0 k+ J; @( }5 p7 Z: n* s; t
3 |) H9 q1 k/ V染料：茜素红（1%）溶于纯水中，pH 4.1。( T) T6 [/ b  g! p
1，细胞用多聚甲醛（4%）固定，至少1h，可以放置2个月；8 F  h) W5 O# G! h# }/ y' P, F
2，细胞用PBS洗涤三次，纯水洗涤3次，每次2min；
- b! R9 \6 q, A- L3，六孔板每孔加入2ml染料，染色20min，放于摇床上；7 X7 r5 |" C8 m
4，丢弃染料；2 M# T: v% r+ x/ z+ P" d
5，纯水洗涤5次，每次3min；
$ Q- J9 u3 B' X5 \5 c" h6，显微镜下观察。
: g6 ^) @. R7 m! H/ k
  X5 t+ [( {! Z6 j! s% Z6 L

tpwang

回复 nanocellmatrix 的帖子* H% w6 |: N: M& m

- J# U: W' s+ C" ~* WTwo Cents:
5 @/ }2 G' p; ]' X. P# B
  t8 f/ S. P2 T5 ~; F% M& z1）理论上体内MSC分化过程中，应该有分裂（不对称），以维持MSC状态的同时提供分化的靶细胞或前体细胞。这个过程理论上应该与niche有关。3 C+ [4 @$ a6 r9 u
2）对称分裂两种可能：都是干细胞，都不是干细胞；不对称分裂两种可能：一个干细胞，一个非干细胞。
! p% x. M/ T0 p- ^3）干细胞不对称分裂受抑制后，应该对自我更新与分化都有影响吧。
, ~% P! M# X. e8 A4）不对称分裂的例子多来自生殖细胞、神经干细胞、皮肤干细胞等，间充质的报道很少见，体外模型也没见过。不过，假设要观察体外不对称分裂，需要设法找到某个条件，设立这个条件的有无两种情况的对比实验，争取观察到一个能维持一定数量间充质的同时产生分化细胞（不对称分裂），另一个多为分化细胞（对成分裂）。然后可以推断这个条件是不对称分裂的重要因素。
" a* ]8 N4 [6 ]$ D8 o% @5）药物处理抑制MSC向成骨细胞分化的现象如果证实，科学意义不好说，临床意义除非是找到成骨细胞大量增生的病理状态，然后你可以说我有办法抑制这种病理增生。间充质干细胞虽然可以有不少体内组织修复功能，但也参与一些病理状态，如器官纤维化。假定这可以是个思路。好像有间充质向成肌纤维细胞分化的研究，大概可以参考。
2 b/ a# B) l# d* R3 V( J- q2 i' m' ]' ]$ u: O2 S7 \+ e
没有文献参考，纯属随想，仅供参考。