MSC细胞是否存在不对称分裂？

nanocellmatrix

* K& N1 r; x" Y  K: N3 L. m8 q

3 v. n# v/ e6 Q9 ~. m最近，我筛选到一种药物，体外实验发现药物处理后，MSC难以向成骨细胞分化。
2 N! w/ D8 h. R9 b: g我的背景是化学生物学，干细胞尤其MSC分裂和分化信号通路知识很欠缺，希望得到大家指点和帮助。) Q  C% \7 S1 I* X  N- Y4 U' i4 Y
实验设计如下；6 g6 Y, `4 y  Z2 \2 s  e9 H% {# Y
    1）提前用药物处理MSC细胞 3天或7天0 `& G2 {, \6 B: L" T
     2）然后撤出药物；
) q# u, d  D: g. Z    3）加入成骨诱导培养基（OS）诱导分化21day，% ~! p' n" f6 R. i
结果： 药物能明显抑制MSC分化。ALP活力低；矿化结节数目是正常诱导组的10%；
: E8 ]) e2 P* m, P9 K3 c( h: Z) ~/ q# c3 a
现在对下一步实验很迷惑，向战友请教MSC分化和细胞分裂的问题。
# _( R0 ^' H* ~  s  p9 J% |    基于这一现象，我得出的结论很可能是药物抑制了MSC的成骨分化能力。
7 {# |2 Y/ c0 U7 Z' |% w6 c; s/ e请问：# @- H0 ?/ k' _' q1 }
1）MSC向成骨分化过程中，细胞是否仍然分裂？$ m: a3 \) v! G' ~+ C% P
2）如果存在分裂现象，是对称分裂还是不对称分裂？分裂后细胞为MSC还是成骨祖细胞？
$ i7 \9 y! l# Z) l; `0 }3）如果MSC不对称分裂受到抑制，是不是就难以分化？
8 x- e  X5 J, A! q+ B( u0 |4）请问大家是否看到MSC不对称分裂的报道和综述？请不吝赐教。MSC不对称分裂是否存在体外模型？/ p, K/ c$ t! G- g. x$ G
5）如果药物处理后，MSC向成骨分化被抑制。那么这种发现有科学意义吗？那么这个现象能从其他方面去解释吗？
! V( W  a' I- B! R5 b    请畅所欲言。也可email联系：nanostemcell@yahoo.com.cn

aminhair

不存在。

nanocellmatrix

请问为什么不存在？

金戈

应该是存在的。不对称分裂和对称分裂是干细胞的特性。

nanocellmatrix

那么抑制干细胞成骨分化有没有研究意义？作为实验研究的抑制剂?

nanocellmatrix

8 r& {, O8 p+ E! f) f+ A8 J
. e& P4 {; o' }, z9 x: u7 [本实验采用的三组样品，先上传图片。
+ j2 Y, B6 t3 w2 Q3 n对照（诱导剂）；药物1（强烈抑制分化）；药物2（部分抑制分化）。8 v) F4 B: ^5 o9 ]9 p2 q, N

9 n+ W" Y* Q+ ]! J药物1和2对MSC无明显细胞毒性，但是诱导剂加入后两种细胞形态明显差异。2 W$ x' R, _$ j7 s" v; X6 A( t
- U# [$ v% A" S7 ?% V8 W
还要向大家请教几个问题：. e8 r' p* y# A6 H" k
1）不知道能不能从中看到什么？是否对细胞骨架有影响？
- E; M! ]* |0 N8 a2）成骨祖细胞和MSC是否有特异marker？
" [4 n/ \) ^7 G/ b& J3）如果筛选到成骨分化抑制剂，对临床和科研是否有意义？

stemcell8

回复 nanocellmatrix 的帖子0 f  t1 o0 l; b! M

4 D6 V* f: z5 K" x8 y7 s; K6 y( v看样子效果比较明显，具体说明什么呢？我想应该结合临床或疾病模型，对那些不应该成骨的位置起抑制作用吧，或是直接发一篇体外抑制成骨文章，做几个成骨基因的检测，证明在基因水平和成钙水平上都有抑制作用，就大功告成了吧！不是很懂相关东西 对骨诱导和染色步骤很感兴趣，请发一个Protocal给我好吗谢谢 我的邮箱jiweicust@163.com

stemcell8

回复 nanocellmatrix 的帖子
, U6 }/ N* P3 A, m
! \7 v" g% r% Z/ s: V感觉你的图片很漂亮 赞一个

nanocellmatrix

诱导剂配方：/ o7 r( {. d2 v
地塞米松 0.1 uM, b-甘油磷酸钠 20 mM，维生素C 50 ug/ml。诱导21day: H0 f: q6 s" e0 @. M
+ s, E5 c: l$ V) Z3 S
染料：茜素红（1%）溶于纯水中，pH 4.1。
) N9 _# T3 c& [( @% {1，细胞用多聚甲醛（4%）固定，至少1h，可以放置2个月；/ f4 r( v0 n( F( D5 p" C, {
2，细胞用PBS洗涤三次，纯水洗涤3次，每次2min；
, \! p* S# ?1 X$ e7 Y' K' g3，六孔板每孔加入2ml染料，染色20min，放于摇床上；% L" G' A( Z& q8 f6 \
4，丢弃染料；
+ a5 f9 ]. u: ]" p/ I( F0 l2 j- n6 S5，纯水洗涤5次，每次3min；% y8 @( b7 O- |. `+ M; ^
6，显微镜下观察。
: e0 X: B4 X: b, Y+ P5 u9 p
/ U3 x* M( O  ~- T) K7 A0 j

tpwang

回复 nanocellmatrix 的帖子0 G  b, t4 x/ O5 N8 Q0 f
+ n1 L( L( A9 r
Two Cents:3 d# e( ]/ R0 C) F2 I& w, W

& i  g/ i& P+ w) s5 U1）理论上体内MSC分化过程中，应该有分裂（不对称），以维持MSC状态的同时提供分化的靶细胞或前体细胞。这个过程理论上应该与niche有关。
# Q, C/ H/ D9 [: P2）对称分裂两种可能：都是干细胞，都不是干细胞；不对称分裂两种可能：一个干细胞，一个非干细胞。
. H8 \' O. Y4 k& ?3 M: w3）干细胞不对称分裂受抑制后，应该对自我更新与分化都有影响吧。
# D+ V) h1 W. E+ `* @* _2 \: e# F* q4）不对称分裂的例子多来自生殖细胞、神经干细胞、皮肤干细胞等，间充质的报道很少见，体外模型也没见过。不过，假设要观察体外不对称分裂，需要设法找到某个条件，设立这个条件的有无两种情况的对比实验，争取观察到一个能维持一定数量间充质的同时产生分化细胞（不对称分裂），另一个多为分化细胞（对成分裂）。然后可以推断这个条件是不对称分裂的重要因素。) l& W3 W, _$ M6 A
5）药物处理抑制MSC向成骨细胞分化的现象如果证实，科学意义不好说，临床意义除非是找到成骨细胞大量增生的病理状态，然后你可以说我有办法抑制这种病理增生。间充质干细胞虽然可以有不少体内组织修复功能，但也参与一些病理状态，如器官纤维化。假定这可以是个思路。好像有间充质向成肌纤维细胞分化的研究，大概可以参考。- I# _5 {( D- Q8 g! {6 j* d& b

# y* z- H8 U6 i$ c; H" Z4 r没有文献参考，纯属随想，仅供参考。