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[请教] 干细胞培养细菌,真菌,支原体的检测   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2011-3-16 13:30 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
关于干细胞成品细菌,真菌,支原体的检测,不知道各位用到什么方法?请教
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沙发
发表于 2011-3-16 14:24 |只看该作者
我们一般用鲎试剂检测细菌中中的内毒素
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藤椅
发表于 2011-3-16 15:07 |只看该作者
细菌真菌,我们都用相应的平板检测,支原体用IST试剂盒来检测的,内毒素用鲎试剂检测,病毒用PCR检测
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板凳
发表于 2011-3-16 15:12 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
原理︰利用萤光染剂(bisbenzimide, Hoechst 33258)侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域,因为支原体之DNA中A-T含量占多数(55~80%),所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后,在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点,即为支原体之DNA,证明有支原体之污染。 9 Z. a* I! e! G9 W9 l! v6 V9 V+ v2 {
·  测试步骤用间接步骤,将待测细胞悬浮液或细胞培养液接种于指示细胞培养液中(indicator cell,例如Vero cell or 3T6 cell),然后培养指示细胞再作萤光染色。正负反应对照组亦可以接种于indicator cell内作为对照。
4 }5 R: L, g& h; }( j; a, U·  待测细胞亦可作直接测试,但需为吸附型细胞,培养后直接作萤光染色。有些细胞易有萤光背景,而干扰结果判读,则建议使用接种于指示细胞之步骤。
% g" M( y3 t; r2 M# E# C3 M8 i·  特点︰简单、经济与灵敏,广泛使用,可作为例行之侦测步骤。可以侦测不易培养之支原体,例如M. hyorhinis,较直接培养法快,约一星期即可知道结果。 ; s3 Y/ ^$ J/ `# S2 T
·  缺点:有时仍会有萤光背景,影响判读。 2 c" T2 o, E3 g8 W4 W6 z7 L
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报纸
发表于 2011-3-16 17:35 |只看该作者
非常感谢。不过支原体有80多种,一般检测方法不全,鲎试剂检测限很低,都需要稀释。不知道哪位有干细胞培养质控方面的经验或者设计方法。多谢!
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地板
发表于 2011-3-17 11:47 |只看该作者
就DAPI染色嘛,只要核的边缘都还比较清楚,应该就没多大支原体方面的问题。至于细菌真菌,培养基颜色及显微镜下都可以看得出明显有问题的吧
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发表于 2011-3-23 17:20 |只看该作者
其实,简单的就行了
: o  Q5 h4 g" E" A6 |现在对于支原体衣原体的检测手段是有不少,但是效果都很一般- J4 G4 r. \2 h" M. e) Q
直接观察细胞的增值效率,没有什么大的异常现象,然后用Hoechst或者DAPI染色细胞核明亮清晰边缘完整就基本可以断定支原体衣原体没什么问题了;; Z& o& o/ v( z7 ]8 @) X
细菌真菌的就跟容易了,直接培养细胞几天,要是有的话就会在几天内爆发的,爆发后在显微镜下很好鉴定的。
$ Z) Q9 K' I! h简单的方法就可以,不用搞那么复杂,除非你想卖你的细胞才需要试剂盒来检测。
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发表于 2011-3-23 19:20 |只看该作者
回复 jhu132llh 的帖子' G2 e; E" Y+ z- b! N2 F

) O+ D7 O$ \3 @4 t0 _送医院检验科
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发表于 2011-8-27 13:37 |只看该作者
回复 jhu132llh 的帖子8 ^6 g" O. n1 ^% u3 ^& M
' g" U7 l4 {+ Y
对细菌的试剂盒检测,有什么推荐的啊。。。。1 d$ H5 I! ~+ x8 G6 ~0 {  Y' Q
谢谢

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发表于 2011-8-28 08:45 |只看该作者
回复 aspring 的帖子$ M/ b; y* N3 \8 z3 d

# X+ W( K% p9 q( N; I! X; S" W细菌检测得先做一个简单培养分类3 f) w' Z. S; e# J
一般情况下只需知道大概是什么类型的细菌就可以的% d- j& \9 U# N( M2 n6 [0 R- P
然后采取相应防治措施即可
% ~8 k: J5 b# [- G% n2 c不一定非得要分类到具体吧
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