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ES 细 胞 是 来 自 着 床 前 胚 胎 或 胎 儿 原 始 生 殖 细 胞 的 、可
( W0 F6 }8 h# T8 m3 i8 G; ~在体外分化状态下长期增殖传代培养的、具有稳定的二倍体
3 b+ T8 \" _* j8 _核型和多能干细胞表面特异标记的、可分化为三个胚层来源
/ O9 r, L" o4 P, ]6 r1 Z5 O3 q的各种组织及细胞类型的永久细胞系。ES 细胞鉴定的理论
& X( h" {. }0 ^7 k) a基础是其生物学特性。; Q4 [: i& Z1 a
形态学特征 ES 细胞在胰酶和无 Ca2+、Mg2+培养液中形+ M8 w6 c7 `8 k! B( a
成相对扁平紧密的克 隆 群 , 并 易 解 离 为 单 一 细 胞 ; 而 胚 胎 生7 E) u0 e! R% X
殖细胞(EG 细胞)为圆形克隆群,且很难用常规方法解离。ES5 X# T0 R& {6 ^: k0 [% i) H
细 胞 生 长 缓 慢 , 对 数 生 长 期 为 36 h, 而 EG 细 胞 对 数 生 长 期
# F8 }9 Y; k) S3 B9 z为 12 h。人 ES 细胞与哺乳动物 ES 细胞具有相似的形态特征:
+ E( h# k9 X4 r/ R- D/ m细 胞 体 积 小 , 核 大,胞 浆 少 , 有 一 个 或 多 个 核 仁 , 核 质 比 高。
/ ^. C) x! a# SES 细 胞 在 体 外 培 养 时 呈 集 落 状 生 长 , 就 集 落 形 态 而 言 , 人
5 O( d' Q$ `* f1 aEG 细胞集落与小鼠 ES 细胞集落更接近呈紧密牢固结合、多/ U* {- g, _. R' ~: m8 O
层密集立体生长的无明显细胞界限的集落; 而人 ES 细胞集
3 V4 X$ a& @8 f" R8 A1 g9 T落呈相对松散、扁平状集落, 集落内细胞界限隐约可见。9 I' l( V. K) L, F# n2 @) e( f
4 ~ I9 p8 b: W
核型分析 ES 细胞具有正常稳定的二倍体核型, 可作
9 i [2 {1 _. s: X为生物发育机制和移植分化细胞的 研究模型。
! Y2 h& p5 Y" m; X7 Y S* ^ ?1 Q- N& X
端 粒 酶 活 性 端 粒 是 位 于 染 色 体 末 端 的 重 复 DNA 序
% \5 b6 s+ [" r3 k0 P列—TTAGGG, 其长度作为细胞分裂及细胞衰老的生物时钟。
6 y Q) @6 x5 ]& A9 o" l% ^它在每一次分裂中都会变短, 但可被端粒酶修复。端粒酶是
5 m* Q2 f2 O! m3 V- D1 q一种核糖核蛋白, 与维持真核细胞染色体末端的端粒长度和2 q) S& [: l# S9 d
控制细胞寿命有关。端粒长度对其复制寿命具有很重要的作- \) \+ v& ~& G4 U
用 , 端粒酶的 表 达 与 人 细 胞 系 的 永 生 化 程 度 高 度 相 关; 向 人
6 Y9 t9 Q- R' V2 x的某些二 倍 体 细 胞 中 重 新 导 入 端 粒 酶 活 性 将 会 延 长 其 复 制
6 ^1 ]. f! l9 _寿命; 人的二倍体细胞不表达端粒酶活性, 随着年龄的增长,
& L" d W4 d5 n0 n: h其染色体端粒 变 短 , 在 组 织 培 养 过 程 中 , 经 过 有 限 的 增 殖 期
]$ x* B+ Z H2 A5 |后, 即进入复制衰老状态。大多数体细胞的端粒酶活性都不高,: r" l1 q3 l' t7 x# N; K
并在 50~80 代有限的增殖后进入老化阶段。ES 细胞则表达
. O2 x0 q* L9 t+ n6 z- G$ x高度端粒酶活性, ES 细胞即使长期培养 1 年, 传代 300 代仍7 s7 T* [3 s, T4 Y3 h+ @
表现有高端粒酶活性, 表明其复制寿命要长于体细胞的复制
- `0 t5 p: n$ q+ D7 H) n寿命。由于 ES 细胞在体外培养中长期保持早期胚胎细胞的) n/ i) u/ b$ g3 k
性质, 因而对研究细胞衰老和干细胞扩增机制有重要意义。' v) }4 z2 ^$ ^5 y; K) z; [) ?$ E* m* i
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细 胞 表 面 抗 原 的 表 达 ES 细 胞 具 有 表 达 早 期 胚 胎 细
. F) {5 P" Q$ h' [胞、EG 细胞表面抗原的特性。人 ES 细胞表面抗原的表达与( p, l; `$ H, v5 E4 V* ?' D( k3 x
小鼠 ES 细胞存在明显的种属差异, 如小鼠 ES 细胞表达早期
( s$ z) G! t& H1 b* i: h胚胎细胞 的 特 异 性 表 面 抗 原 SSEA- 1, 但 并 不 表 达 SSEA- 3
" A8 ~+ g& c$ z( ?$ k和 SSEA- 4,而 人 ES 细 胞 则 表 达 人 早 期 胚 胎 阶 段 特 异 性 抗
c; o( P% B: N1 K [ |原 SSEA - 3,SSEA - 4,TRA - 1 - 60,TRA - 1 - 81; EG 细 胞 表 达
4 w' ^9 M' L7 Q2 z( b! s) V$ k- dSSEA- 1,SSEA- 3,SSEA- 4,TRA- 1- 60,TRA- 1- 81。 人 ES 细 胞- Q* _6 }' e+ q
表 现 SSEA- 1 阴 性 , 而 小 鼠 的 ES 细 胞 和 EG 细 胞 则 表 现
7 O% T, k8 y) U- ]$ i; v& \% l+ jSSEA- 1 阳性, 因此, 常用单克隆抗体 SSEA- 1 检测 ES 和 EG
1 h' [5 C- T- T- o! e+ U. r- S2 O细 胞 表 面 抗 原 作 为 发 育 全 能 性 的 一 种 标 志 。 目 前 认 为 ,6 ~; t: B9 B- s8 t
SSEA- 1 的表达与否, 可能反映了相对扁平疏松结合的 ES 细
7 @% |; p8 c/ S- W) n: L胞 集 落 ( SSEA- 1 阴 性 ) 与 多 层 叠 垛 集 落 的 ES 细 胞 ( SSEA- 1- T/ _# Q7 @/ c$ z; w% c4 c
阳性) 之间的差异。碱性磷酸酶(AKP)活性常被 用来作为鉴
7 k6 {' R; E) k L, T定 ES 细胞及其分化与否的重要标志。在早期 ES 中 AKP 活
# N2 d* }# ~% d' N性较高, 而在已分化的细胞中活性明显降低。& b! ^% H0 `. T. y4 _6 H& b
! R9 M' K* r* Q. @) F 转 录 因 子 Oct- 4 的 表 达 Oct- 4 是 一 种 发 育 全 能 性 的, ?0 z3 V) z# z! D' X* w( U
标志基因, 为 POC 区域的一个转录因子。在小鼠, Oct- 4 只限( U, K' V: Y* A( U
定在多潜 能 细 胞 中 表 达。
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# ^' C6 I$ d% c6 B8 G S0 e 体内外分化能力 畸胎瘤和类胚体的形成 |
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发表于 2011-3-20 21:03
谢谢5 N: I9 o+ X9 k5 F W" L9 ~. F