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ES 细 胞 是 来 自 着 床 前 胚 胎 或 胎 儿 原 始 生 殖 细 胞 的 、可
" ^' N0 E K+ q/ F" N: g# S2 o% Z在体外分化状态下长期增殖传代培养的、具有稳定的二倍体* v' c. [+ @! a
核型和多能干细胞表面特异标记的、可分化为三个胚层来源& \& I s6 {" x* D) y
的各种组织及细胞类型的永久细胞系。ES 细胞鉴定的理论
( Q- I0 G) d* ?1 c, B基础是其生物学特性。) a8 ]7 \9 |! g' b0 r4 _$ c
形态学特征 ES 细胞在胰酶和无 Ca2+、Mg2+培养液中形
: V9 f9 j. W5 z. {1 ?& q- g P成相对扁平紧密的克 隆 群 , 并 易 解 离 为 单 一 细 胞 ; 而 胚 胎 生- A2 K+ ^- V* _- i0 [
殖细胞(EG 细胞)为圆形克隆群,且很难用常规方法解离。ES
# y4 L: a3 a8 Q& N2 |细 胞 生 长 缓 慢 , 对 数 生 长 期 为 36 h, 而 EG 细 胞 对 数 生 长 期$ V6 {" P, l* k& Z( E
为 12 h。人 ES 细胞与哺乳动物 ES 细胞具有相似的形态特征:
4 b% Z/ [6 g7 w% A( e细 胞 体 积 小 , 核 大,胞 浆 少 , 有 一 个 或 多 个 核 仁 , 核 质 比 高。, d) Z, [* X7 c" {
ES 细 胞 在 体 外 培 养 时 呈 集 落 状 生 长 , 就 集 落 形 态 而 言 , 人1 X! J3 i( r" d+ U# [" x! y2 e/ A' l4 k
EG 细胞集落与小鼠 ES 细胞集落更接近呈紧密牢固结合、多
8 i! i! m- g+ V3 }+ W6 p! ?, h层密集立体生长的无明显细胞界限的集落; 而人 ES 细胞集
$ G4 ]. O( a7 d& h2 J落呈相对松散、扁平状集落, 集落内细胞界限隐约可见。
: O3 D0 T' Y$ g' g: `- |1 @1 d2 o; b: |9 F2 B" n: j8 {5 q2 }, G7 P) q
核型分析 ES 细胞具有正常稳定的二倍体核型, 可作( l& U7 X. v; B- d- U h1 t
为生物发育机制和移植分化细胞的 研究模型。) b: J0 ]# v- Z- b
* d2 H# ?) k# Q8 Y+ J 端 粒 酶 活 性 端 粒 是 位 于 染 色 体 末 端 的 重 复 DNA 序; T, S( |! q$ u' [$ q; r
列—TTAGGG, 其长度作为细胞分裂及细胞衰老的生物时钟。$ c2 x! R, c2 ~; n3 @
它在每一次分裂中都会变短, 但可被端粒酶修复。端粒酶是
7 ~+ g, h% @$ Z$ r- J一种核糖核蛋白, 与维持真核细胞染色体末端的端粒长度和# \4 z2 w" R6 L6 S. i- A( C
控制细胞寿命有关。端粒长度对其复制寿命具有很重要的作 `. P8 D3 X# V
用 , 端粒酶的 表 达 与 人 细 胞 系 的 永 生 化 程 度 高 度 相 关; 向 人) h0 Q- y; s8 B. T* w; h
的某些二 倍 体 细 胞 中 重 新 导 入 端 粒 酶 活 性 将 会 延 长 其 复 制
: e F6 l% d7 F0 R, }* g% P寿命; 人的二倍体细胞不表达端粒酶活性, 随着年龄的增长,
5 {$ p: z/ V5 y" `) a; `其染色体端粒 变 短 , 在 组 织 培 养 过 程 中 , 经 过 有 限 的 增 殖 期
) V1 j6 O7 A/ I2 B1 E后, 即进入复制衰老状态。大多数体细胞的端粒酶活性都不高,: l& f3 Q+ z: y9 K) t
并在 50~80 代有限的增殖后进入老化阶段。ES 细胞则表达' |. Q/ w; K" x- _5 w3 M2 f, `3 U8 Q
高度端粒酶活性, ES 细胞即使长期培养 1 年, 传代 300 代仍6 L, P& X7 M6 w$ {8 Z c
表现有高端粒酶活性, 表明其复制寿命要长于体细胞的复制
' B4 K( x' H$ h+ `寿命。由于 ES 细胞在体外培养中长期保持早期胚胎细胞的
; U2 e/ z! n+ k% k( u+ J性质, 因而对研究细胞衰老和干细胞扩增机制有重要意义。
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细 胞 表 面 抗 原 的 表 达 ES 细 胞 具 有 表 达 早 期 胚 胎 细; R1 ^, g! \1 a
胞、EG 细胞表面抗原的特性。人 ES 细胞表面抗原的表达与; l3 i. ^' V) o6 r p
小鼠 ES 细胞存在明显的种属差异, 如小鼠 ES 细胞表达早期
- w, q0 ?: ^' H9 E: M! O胚胎细胞 的 特 异 性 表 面 抗 原 SSEA- 1, 但 并 不 表 达 SSEA- 3
& I" W* R# @+ C$ i* x$ M. k和 SSEA- 4,而 人 ES 细 胞 则 表 达 人 早 期 胚 胎 阶 段 特 异 性 抗% `# m, g2 {' h0 c
原 SSEA - 3,SSEA - 4,TRA - 1 - 60,TRA - 1 - 81; EG 细 胞 表 达4 n5 w5 |, @0 j
SSEA- 1,SSEA- 3,SSEA- 4,TRA- 1- 60,TRA- 1- 81。 人 ES 细 胞
# U0 t; q* V) }, R/ O表 现 SSEA- 1 阴 性 , 而 小 鼠 的 ES 细 胞 和 EG 细 胞 则 表 现
& z5 g* k1 g2 L+ t5 XSSEA- 1 阳性, 因此, 常用单克隆抗体 SSEA- 1 检测 ES 和 EG
% f" j- T, y! x7 B- n, N) e细 胞 表 面 抗 原 作 为 发 育 全 能 性 的 一 种 标 志 。 目 前 认 为 ,. d! Y" M. e# @" w: V! A
SSEA- 1 的表达与否, 可能反映了相对扁平疏松结合的 ES 细8 A' r/ ]8 { x6 l; C
胞 集 落 ( SSEA- 1 阴 性 ) 与 多 层 叠 垛 集 落 的 ES 细 胞 ( SSEA- 1( J' J) e4 r9 ]& w' J& m
阳性) 之间的差异。碱性磷酸酶(AKP)活性常被 用来作为鉴! \" V0 ~: M$ C/ J% U. I4 G
定 ES 细胞及其分化与否的重要标志。在早期 ES 中 AKP 活7 y3 T. B: R4 H- o# `
性较高, 而在已分化的细胞中活性明显降低。
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( F s( T7 k# F! r% _ 转 录 因 子 Oct- 4 的 表 达 Oct- 4 是 一 种 发 育 全 能 性 的
7 m- Z, T& @! e2 W+ G) j" ~6 \标志基因, 为 POC 区域的一个转录因子。在小鼠, Oct- 4 只限
, j' i6 f0 @. ?! C( Q' m6 }定在多潜 能 细 胞 中 表 达。. L0 |' U, S& j' B. e( V, H4 Y
4 k @$ f4 Z2 L) U. Y# f
体内外分化能力 畸胎瘤和类胚体的形成 |
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发表于 2011-3-20 21:03
谢谢
