求助逆转录病毒载体共转染293T（附图）

ada800515

做了好多次逆转录病毒载体共转染293T，效果都不好，荧光很淡，如图，想问一下这样算转染成功吗？荧光为什么这么淡？麻烦各位提供一下经验

yuangaoqian

怀疑你的细胞有问题，之前我们做慢病毒包装也出现过类似的情况，最后发现由于293T传代次数太多或状态不好就无法进行包装，换细胞后包装效果就好了。所以建议你换细胞试试。

ada800515

293t国内有好的代数少的细胞株吗？我的293t状态不错，但是有17、18代了吧，不知道是否有影响啊

jane1lee

回复 ada800515 的帖子* V, ~, @  L' K

$ |3 g. k  y8 H这样的转染效果不好！一般转染用的293T是低代次的，我们一般用的是复苏两代内的细胞！转染的时候转染试剂与转染质粒比例是要用实验摸索的，你可以试着改变下比例，293T细胞的生长状态很重要！

ada800515

问一下楼上的，293t细胞17代是否有点老啊

jefferson

这个结果来看, 包装的病毒基本是不能用的. 效率太低了
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5 y# B9 [2 Q- D5 a9 w两个未知问题是, 什么载体共转的和用什么试剂转的?
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除开这两个, 没有细部的白光照片, 无法判断细胞状态. 一般即便细胞状态不佳也不至于低成这样. 细胞状态的确对包装效率影响很大, 建议293T细胞复苏后标记为P1代, 连续传代到P10代后就冻存, 重新复苏计算.

pei

转染前293T的状态很重要，转染用的各样试剂的PH也很重要。我们都是用293FT的，荧光都很强啊。

ada800515

前两个图是转染后48h的293t细胞，死细胞较多，转染时大约80%~90，后两个图是未转染的293t细胞（临时照的，有点密），感觉细胞状态还可以吧？另外我用的质粒是pMIG,pUMVC和VSVG，转染试剂是lipo2000。

jchzh432

我们用的也是这套逆病毒系统，可能你的pMIG质粒有问题吧，看着293T状态挺好的，我包的时候293T传很多代都没有问题都能包上！

ada800515

楼上的哥们，能否交流一下啊，我的qq26178534，谢谢了