乳腺癌组织提取原代的成功率

shen_coco

我师兄是做乳腺癌干细胞方面的研究，参照既往文献的方法，
" p& k, l- n+ e: }, j( s' e& j整个硕士期间，只成功了一例，我想接着师兄的课题做下去。
4 t# m; ^. \' H& B想问问论坛里的各位高手，有谁提取过乳腺癌的干细胞，
, V0 d7 y: u" Z: Z乳腺癌原代提取干细胞成功率高不高啊

shen_coco

我师兄提取的方法大概如下：1，将乳腺组织剪成1mm左右* p! [# H. \- _2 O. P
                                              2，消化6-8小时，消化液配制如下，DMEM-F12培养基，100单位/ml 胶原酶，150单位/ml透明质酸酶，5mg/l 胰岛素，10%小牛血清，双抗. z: W0 N% D' l* t3 L
                                              3, 80g离心4min，收集沉淀，培养基洗一遍
8 {3 A/ o5 H: D; R' w                                              4，胰酶消化10min，加等体积DMEM-F12培养基，10% fbs中和: B; \$ W" @* r: m
                                              5,  400目的滤网过滤
9 A  w2 z7 X, `4 w# m                                              6, 80g离心，DMEM-F12制成单细胞悬液# J* ]0 }- Y' d  H
                                              7，接种到培养瓶。
$ X. {1 }2 i7 R. J9 X  Q干细胞培养基配方如下：DMEM-F12，EGF10 ng/ml，bFGF 10ng/ml，5mg/l 胰岛素，2% B27。
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. u3 S, M; _& A; I" e8 y0 L由于经费有限，我师兄用的是普通培养瓶。大家看看，成功率这么低主要问题是在哪里呢？请各位赐教) s7 t- h7 A& R- A

亮亮燕燕

消化时间有点长吧！还有培养基是最适合的吗？

shen_coco

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消化6到8小时不长吧，我们用的培养基就是文献报导的培养基

亮亮燕燕

我做肝组织，只消化30min到一个小时！可能乳腺组织消化的时间比较长吧！还有培养液文献里的也不一定就是最合适的！

shen_coco

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哦，那怎么样确定最佳培养基呢？你提肝组织的成功率有多少呢

亮亮燕燕

我就是把各种文献里查到的培养基都给试了试！筛选了一下。还从别的实验室找的他们培养肝癌细胞用的培养基！比较了一下！我一开始培养的时候还行，但是培养上两周左右就不行了，就都有想死的倾向了 ！我也很纠结啊！

shen_coco

回复 亮亮燕燕 的帖子& N6 u( X6 B! _( x' B
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乳腺癌干细胞好像大家用的都是同样的培养基哦，我看所有文献用的培养基都差不多一样

亮亮燕燕

那会不会是你们的细胞培养室，培养箱什么的问题！原代细胞本来就不好养！我也还没培养成功过！真是郁闷那！

shen_coco

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有可能，我自己慢慢实践吧，哈哈，咱们共勉吧，祝你早日成功~~