紧急求助各位大侠有关实时定量疑问 有图

scienese

模板是三个早期胚胎  跑电泳有目的条带  但是荧光强度——温度曲线不呈典型的S型而呈抛物线型, r$ Q  F& n. W7 O* S3 a" O
请高人指点  呵呵呵5 D% `& }( X, w6 m1 F
试剂盒买的TAKARA的
  l4 i% Y6 u, I7 |$ u  G# a

scienese

回复 BenHantun 的帖子& w. L1 s% F/ P: @4 U
+ o/ C: M- V% l2 q! B( q: p9 I
我这里有四个基因，其中一个是内参，模板量我也试过了25微升的体系加到4微升还是这样，而且，我的模板很珍贵的，攒了好久呢，这个CDNA是用Invitrogen 的单细胞提取试剂盒做的。PCR仪是博日的

scienese

回复 runsong 的帖子
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+ f$ Q" _5 ?6 c; d+ }+ E3 ^我这里有四个基因，其中一个是内参，模板量我也试过了25微升的体系加到4微升还是这样，而且，我的模板很珍贵的，攒了好久呢，这个CDNA是用Invitrogen 的单细胞提取试剂盒做的。PCR仪是博日的

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回复 runsong 的帖子- q  Y, k/ c; H  j$ ~6 z. y

. o9 @* W5 X& T 体系中没有家DMSO  以前加过 但效果不明显 没有加Mgcl2好 9 K; S0 |1 n, C! X4 m  c: [2 v
跑电泳只有目的条带

scienese

) V: f0 o# K# w$ K; A' B

7 M, K0 g/ Z$ z; c$ n2 ?回复 gact 的帖子
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RNA用invitrogen的盒子提的（货号：18080300）' v- ?9 i3 K0 w
Qpcr用的两步法

scienese

这里有补加DMSO和补加Mgcl2的   给位大侠请指点

scienese

回复 aminhair 的帖子$ u5 H$ [( [* D; V+ X

1 H% B- l, o8 R  y0 V( Y, m: d首先感谢各位大侠的帮助  我已经找到问题的原因了  模板量太大了
/ q0 f3 I$ ^% |+ _) H我做了10倍和100倍发现结果变好了  有机会会把图上传的
- \& T6 y8 [3 Z; _9 _  q还是要感谢大家

scienese

这是我用稀释十倍的模板做的  效果不错  呵呵

scienese

回复 farmer 的帖子
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1 h2 m# h4 h* P？？？
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