关于脐带间充质干细胞培养

sunjianhua2000

近期做了几次脐带间充质干细胞培养，但效果不是很理想，所以想请有经验的大侠给与指导！& l: ~5 B+ t' D/ C
具体操作方法- ^. K* V' J4 G$ B! T7 Q
原代培养：组织块培养法。无菌条件转移脐带组织至操净台，剔除血管，将组织剪碎至1mm见方大小（未剔除外层羊膜层），15%fbs-dmem低糖培养液50ml混匀接种到培养瓶中，5天后补液20ml。培养至8天左右镜下可见细胞贴壁，15天左右见小克隆团，20天换液但发现细胞克隆团没有变大，细胞量增殖不明显，远远没有达到传代要求（感觉细胞像失去生长力了，而且形态也不好）。至今未查明原因。
) g# g; h; `4 z* p+ H# z请大侠给与指导,请大侠给与指导！

lizzy_81

后期还要加添一些生长因子之类的吗？一般可以扩增多少倍啊

Learner

回复 yuyabinbin 的帖子; v" |! ~" t# S3 P9 w
/ j1 n" K1 F- @* }3 ~
脐带基本上是医用垃圾，跟当地产科病房联系一下应该不难拿到吧！

zarecol

脐带间充质干细胞提取时，最好去掉羊膜层（就是脐带外膜）。在有在换液时要去掉已经飘起的组织块不要心疼，否则反而会影响细胞的生长。

清影

回复 yuyabinbin 的帖子
1 q; Y: `0 H" e* s9 V* Y2 ~8 t. ?: _3 a! V0 ^
嘻嘻，那就要看你们老板舍不舍得下成本了，这年头哪有钱办不到的事！

gaorongbest

回复 流云阿凯 的帖子$ I+ [# D) \" x6 g

: L& o) R* t7 a8 c3 ~用组织块好培养还是用酶消化法好呢？如果是组织块培养，接种密度怎么把握才好，如果太密可能就长的细胞少了

yuyabinbin

回复 清影 的帖子
8 O2 O4 B. `1 ~+ A* W: r5 z6 E! B; y9 u6 ?2 I# ?# O! v6 z2 C
我问一下你们脐带这么容易拿到啊

清影

回复 sunjianhua2000 的帖子9 ~9 {0 G, Z* b$ ~* q
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你加了50ml培养基，后期有补加20ml,你有多少胶质啊？组织块都飘起来了吧?还有就是细胞间的抑制作用，最好把外层的羊膜层剔除

embryonic12

初代培养用35mm皿较好。可早些传代，不必等他长满。在这初代培养本来就不可能次次成功，需要运气

sdwzg119

我们也用组织块法培养，基本每条脐带都能长出细胞，最长的养15天就能传代了，快的十几天就成了，你原代培养也长出来细胞了，15天就应该传代了，你感觉细胞少就传个小瓶嘛！不拖太长时间。还有细胞少的原因可能是你贴的组织块太多了，少弄点。