Cell stem cell最新文章：Highly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming

xyklmu

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Cell stem cell Volume 8, Issue 4, Pages Pages 376-388 (8 April 2011)   
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Highly Efficient miRNA-Mediated Reprogramming of Mouse and Human Somatic Cells to Pluripotency0 |% {* M2 d0 B$ ?

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( T' n6 M. z) Y0 F* C! I% zFrederick Anokye-Danso, Chinmay M. Trivedi, Denise Juhr, Mudit Gupta, Zheng Cui, Ying Tian, Yuzhen Zhang, Wenli Yang, Peter J. Gruber, Jonathan A. Epstein, Edward E. Morrisey" j8 j4 S( F$ Q7 U$ K
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Highlights
8 e2 c+ ^( u; U8 W. V, a6 w► miRNAs alone can reprogram somatic cells to pluripotency
8 o3 M* s$ V" k: i$ {► The miR302/367 cluster reprograms both mouse and human fibroblasts . v, a& V! P2 e  j
► miR367 is required for miR302/367 reprogramming
% j5 Z  F7 X  J8 t  y► Low Hdac2 levels are required for miR302/367 reprogramming
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现将这篇文献及附件信息贴上，欢迎大家进行讨论。
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+ a6 [# N3 c; d4 G' A海洋注：本文跟帖中有很多不同意见 本文是否存在作假可能 欢迎大家参与讨论 发表自己的观点
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xyklmu

2010年Science杂志总结出的10大科技进展中，有关细胞重编程的描述：
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/ Y- T* r6 B* a7 K" jSouped-Up Cellular Reprogramming
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Changing a cell’s fate by adding extra copies of a few genes has become routine in labs around the world. The technique,
9 }+ L, m3 E$ A! t# h4 ~& B) E/ mknown as cellular reprogramming, allows scientists to turn back a cell’s developmental clock, making adult cells behave
7 T5 H1 y) \1 _like embryonic stem cells (see “Insights of the Decade,” p. 1612). The resulting induced pluripotent stem cells (iPSCs)% f/ W" y; N4 g% _( e8 Y, p
are helping scientists to study a variety of diseases and may someday help to treat patients by supplying them with genetically  @2 V' T$ k4 k3 q# t
matched replacement cells.# n" T9 }! k* F; |
This year, scientists found a way to make reprogramming even easier using synthetic RNA molecules. The synthetic RNAs8 [. X8 h8 e+ o' L$ K# c
are designed to elude the cell’s antiviral defenses, which usually attack foreign RNA. The technique is twice as fast and 100 times
  e' _( G# B& a( a* Q: G0 R8 ]4 Oas efficient as standard techniques. And because the RNA quickly breaks down, the reprogrammed cells are genetically identical
  g; O, D7 @! w  S& H) c  lto the source cells, making them potentially safer for use in therapies.
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5 f4 c- b' R, ]2 y0 O6 B' i4 xEarly evidence suggests that the RNA approach reprograms the cell more thoroughly than other methods do, yielding a& o4 U' y' U3 U) E1 T$ T" J2 w
closer match to embryonic stem cells. The method can also prompt cells to become nonembryonic cell types. By inserting synthetic
& M" Z$ _( {1 e. Y9 l, p' j- V6 LRNA into a cell that codes for a key gene in muscle tissue, for example, the researchers could turn both fi broblasts and iPSCs into muscle cells.
9 q1 B, Z4 `8 v: t6 `7 Z编者对具有调控的RNA分子在细胞重编程中的作用的预言，这么快就实现了，呵呵，说不定就是文章的作者提前透露出来的消息呢。
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markllq

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这篇文章中利用miRNA302/367 在除去SKOM的情况下直接诱导出iPS，而上个月中科院广州生物院裴端卿组在JBC发表利用miRNA302/367显著提高了iPS效率，两篇文章的区别就在有没有加四因子诱导，最后发出来的文章差别很大，国内科研在创新方面还是不够给力啊！
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附上裴的文章：

xyklmu

1）两篇文章在如何诱导iPS产生的方法方面没有太大的区别，cell stem cell这篇文章用的慢病毒的方法，而裴用的逆转录病毒，后者在感染效率上会略输一筹的。所以前者的作者一直在强调诱导的高效性，两个数量级以上。  P) R. i; _8 Q/ {/ ]/ a4 M& V
2）纵观两篇文章，cell stem cell这篇文章在分析诱导出来的iPS表型marker上做足了功夫，包括including pluripotency marker expression, teratoma formation, and, for mouse cells, chimera contribution and germline contribution.这一点裴的文章似乎有点单薄，他们对MET似乎更情有独钟。6 S4 j* S4 C8 ^
3）cell stem cell这篇文章还对miRNA302/367发挥作用时的协同因素Hdac的表达水平进行了分析，从调控的网络性方面更深入了一步，裴做的也不错，找到了miRNA302/367的靶标。
- Q0 w7 t* b* U! o& ?1 U总体上感觉还是前者的分析比较到位也有深度，我们能够做出来同样的结果，在这一步上可能就有所不及了，个人愚见，呵呵
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snokey

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5 Q- q* d% ^$ m; I8 N3 l' N& m个人很不看好这篇文章，感觉too good too be ... 希望将来别的组能重复出来。
. M3 ^! q' |8 R6 j* B/ y) o第一：做miRNA302/367的Lab太多了，用把这几个microRNA组合起来一起转染细胞，或者用载体表达整个microRNA cluster的工作很多人都做过了，我都知道一个很有Credit的（常有Nature level paper）的组做了好一阵了，没有得到什么非常非常明显的结果。# a! Y8 y- b8 P
第二：关于ES-like 克隆的统计，按文章的统计方法来看，他们得到的人的细胞中的诱导效率差不多为10%（如果我没有理解错的话），我除了惊叹还是只能惊叹。; w) ~3 l3 ?' {. s3 p! H
第三：VPA的作用问题，VPA的作用其实很大程度上是HDACi-indepent的，个人觉得作者的工作只能部分解释MEF里VPA的作用。3 C% L; `& j/ }& D
第四：现在最流行的就是virus-free系统，病毒表达miRNA302/367可以work，直接转microRNA进细胞不就是virus-free/OSKM-free了吗？
; c: J" D8 F  A第五：哈佛那篇靠合成mRNA高效诱导iPS的文章其实也有类似的问题（too perfect）。据我所知有公司重复了，结果很不乐观，实际上那篇文章真的很难重复。我个人一直有个很大的疑惑，关于Fibroblast转染的问题。众所周知，Fibroblast很难转，做过的人都知道，即使用优化的Nucleofection程序，转染效率不过50%，哈佛那篇用RNAiMAx（其实是弱化版的Lip2000）居然就可以搞定了？（而且是那么长的cDNA） 那样Lonza最有名的产品Nucleofector早就没有市场了。
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; C) }* M; j9 T( n. q) _0 i% E个人觉得这篇文章值得借鉴的地方是找出了一些VPA可以提高诱导效率的解释。
# [9 z0 A/ v% D1 M. N4 A8 b; A' }  S时间/重复是最好的判断标准，希望我的观点是错误的。

embryonic12

我们也试过哈佛的那个方案，很难重复，文献就是个文献，科研还得自己做

snokey

楼上的，你打算重复这篇文章吗？

ambassador

有这篇同一期的文献没？( l, ^  C* e# ^5 s
Defects in Trophoblast Cell Lineage Account for the Impaired In Vivo Development of Cloned Embryos Generated by Somatic Nuclear Transfer
# j- A' G5 o8 h8 j7 {8 zJiangwei Lin1, 2, Linyu Shi1, Man Zhang1, Hui Yang1, Yiren Qin1, Jun Zhang2, Daoqing Gong2, Xuan Zhang1, Dangsheng Li3 and Jinsong
) _( f2 `- l3 m$ d3 Q. e% T; _1 ]# `1 L! N! N
链接附上：http://www.sciencedirect.com/sci ... e8161f55c5940736b7e
& @( e2 i5 `1 c' ]
7 _+ Z6 p5 {( [6 E  H各位朋友：帮忙下载一下！

xyklmu

回复 ambassador 的帖子$ g0 P! m+ w4 ?: _/ W7 N

* x5 }. L7 m% z5 r# MDefects in Trophoblast Cell Lineage Account for the Impaired In Vivo Development of Cloned Embryos Generated by Somatic Nuclear Transfer . _0 H3 n7 P/ p& t( |4 u2 Q

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; D, y! L" x$ a
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2 c! n, {+ T* s6 |$ G, C下载好了，楼上的可以下载了  t* B" [4 k# j3 ?$ n% I

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ambassador

xyklmu 发表于 2011-4-9 23:01 / Z9 S9 v" p5 u
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Defects in Trophoblast Cell Lineage Account for the Impaired In Vivo Develop ...

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谢谢啊！虽然同学发给我了。。。