电转染牛成纤维细胞的问题

miRNA

稍等一下，我把所有的buffer都整理一下，发出来....

miRNA

Hank’s buffer：! o! H5 c# ~2 G* T
! u. V0 g/ J0 G1 N
137 mM NaCl;
1 V% _5 |* v; w; t. f8 n  F% ]5.4 mM KCl;
3 t/ J- z% ?" Y3 p0.95 mM CaCl2;
& b2 c' b$ ?& [  F$ e! e% _0.41 mM MgSO4; 1 H7 u( p7 D" Z) P( l, Z
0.49 mM MgCl2; - d8 B2 K' E" f' \4 P
4.17 mM NaHCO3;
4 b$ }# M: r9 A1 N8 x0.34 mM Na2HPO4; 3 A% R9 m3 e$ @2 L
0.44 mM KH2PO4;  
* X7 h' P6 r: j) h/ W/ V  @20 mM HEPES, pH 7.2
7 U! f* u' M6 N+ D( {( N1 z
7 K2 T/ U4 K3 H6 D5 ^/ M% U/ }可以直接购买来自HyClone Hanks' Balanced Salt Solutions(HBSS)。: {0 v, g! I8 k8 P& w; _' b9 x
来自文章---Efficient expression of foreign genes in CHO DHFR(-) cells by electroporation

miRNA

Berg’s buffer& A9 h4 T/ G  P' O
: D1 r1 ~: v$ Z" Q0 o4 ]
7 Y) r! c$ x' ]0 [) j
名称        需要量        分子量        配制100ml所需" n0 ^0 x* ]/ [# s3 [
NaCl        137 mM        58.44        0.8g
1 X8 r& V( j. Q- d9 i) \KCl        5 mM        74.55        0.037g
. y9 g( s+ `" t1 d* p8 r* cNa2HPO4  (-12H2O)        0.7 mM        358.14        0.025g
+ q4 N! j, ^8 P$ F2 K& m/ W* |( F9 tHEPES    (pH 7.05)        20 mM          238.30        0.4766g
! }0 _9 h9 e3 k- I$ w$ ndextrose        6 mM        198.17        0.118902g9 }) v, X3 X7 s+ g- q# X- P
; q2 R  h, ?9 b3 A1 k2 P
同样来自文章---Efficient expression of foreign genes in CHO DHFR(-) cells by electroporation

miRNA

还有Cytomix buffer,文章里面有，就不列出来了...

miRNA

Optimization of square-wave electroporation for transfection of porcine fetal fibroblasts
. P) M' W1 y( R, H7 ~这篇文章里面用的是混合配方:, b" j2 \+ ]6 Y  B
Cells were resuspended in transfection media (75% cytosalts [120 mM KCl, 0.15 mM CaCl2, 10 mM K2HPO4; pH 7.6, 5 mM MgCl2] (van den Hoff et al.1992) and 25% Opti-MEM)
& W; g. R7 j4 [" {' W7 V3 G$ I, ]  a0 d9 Y. c5 X

miRNA

我自己试过1640，DMEM，Hanks' buffer，
1 y# e0 D3 t: @说实话，别浪费时间摸条件了，从公司买现成的电转buffer吧...
( _  k) q; u4 u# K+ l不过个人很看好最后一个混合配方，我自己没有试过，  X" N& d+ D4 S1 F/ K
用各种盐成分配置成的Hanks' buffer和DMEM等相比，感觉有明显的不同，
2 }, h7 s4 @- A4 w因为都是离子成分，应该是电阻很小，电流很大，所需要的条件和DMEM相比应该不一样，
2 B* V7 ]/ T" i3 |所以混合两者成分，应该是好一些...否则只用DMEM会比较钝(？个人理解)...
7 F- ~5 D1 g4 {3 h* q8 ]9 X2 R; x2 q6 l& h) O% }6 W
同时质粒的纯度要很高，如果你只测260/280或260/230是不可能看出来质粒的纯度的...
; y% _2 P4 D/ g& \高纯度的质粒转染效率会明显(?也许只是稍微)高于低纯度的质粒...
( {+ p/ Y8 j# T3 S$ X* ]/ h) c& z  t0 m
希望idealgas会很快做出来...& n# {+ ^$ N  w+ m! L0 E
谢谢您的回信！在此回复，以示感谢！
, m$ S: N* R3 f/ w& z

miRNA

不过假如有的实验室条件已经摸成熟了，都是用的自己配置的buffer,/ i+ c) {1 d. k% v- P) L. \
那就另当别论了...
6 h& _5 S9 t9 e" p4 B; U- k/ m1 g3 R5 `' {' b! y
请"细胞海洋"指点一二...

miRNA

回复 懵懂干细胞 的帖子# n* i, P: m; h+ F0 X

' n$ M9 e- F6 \$ U, l! \PBS都可以，天哪，那您给推荐一下成纤维细胞大致的参数呗...