电转染牛成纤维细胞的问题

miRNA

稍等一下，我把所有的buffer都整理一下，发出来....

miRNA

Hank’s buffer：0 c( s. e/ f/ v8 X3 l7 h0 O: O
0 q) p6 q: c: S8 I
137 mM NaCl;
# K* }9 m1 I4 E1 z7 k5.4 mM KCl;
' o8 J0 q9 i+ C, l0.95 mM CaCl2;
- s; R  m/ _; k8 A3 S5 I: ?0.41 mM MgSO4; . s! H4 @5 `) v# ^) z; h6 _8 ]
0.49 mM MgCl2; ) ]( }( _- ^) B% S  N2 O$ M0 X( n; p2 `
4.17 mM NaHCO3; ; L7 K$ J4 v! b, j$ a- ~" z
0.34 mM Na2HPO4; 1 i: X/ I) Z' l3 T+ S6 o
0.44 mM KH2PO4;  
- ?. r0 x! ?' Q$ k5 c+ b20 mM HEPES, pH 7.2
$ w  [( L5 ]* W# R( O
$ b2 L+ N. @  i2 A$ z+ V  U9 r可以直接购买来自HyClone Hanks' Balanced Salt Solutions(HBSS)。
. [  \9 g/ D! e& W. K来自文章---Efficient expression of foreign genes in CHO DHFR(-) cells by electroporation

miRNA

Berg’s buffer
& `2 n% I+ b" x6 J# K7 E! J
" C2 @; d( X9 k$ b5 M4 g
3 D, ?5 @1 T" i) V! M名称        需要量        分子量        配制100ml所需
9 k% M, c6 [- a: X, Z6 \NaCl        137 mM        58.44        0.8g) g# H. C! v+ p3 ?( P9 H
KCl        5 mM        74.55        0.037g
7 j5 g. j: y# k, q, H* |Na2HPO4  (-12H2O)        0.7 mM        358.14        0.025g
- O0 z3 p8 m% C: ?  K$ Q: w, xHEPES    (pH 7.05)        20 mM          238.30        0.4766g
& N: O( h. |1 h4 G' g; }6 Y' ~dextrose        6 mM        198.17        0.118902g( M) m0 t$ r: V# J" B

8 g5 g4 u" o, |+ e3 z同样来自文章---Efficient expression of foreign genes in CHO DHFR(-) cells by electroporation

miRNA

还有Cytomix buffer,文章里面有，就不列出来了...

miRNA

Optimization of square-wave electroporation for transfection of porcine fetal fibroblasts
; j, L& u$ i9 I  z* L这篇文章里面用的是混合配方:
; `7 j. m/ Y$ c" O. q% }Cells were resuspended in transfection media (75% cytosalts [120 mM KCl, 0.15 mM CaCl2, 10 mM K2HPO4; pH 7.6, 5 mM MgCl2] (van den Hoff et al.1992) and 25% Opti-MEM)8 h$ t6 l9 @1 G- O0 f

- Q4 W' G4 _& M/ g- D/ g6 b0 F

miRNA

我自己试过1640，DMEM，Hanks' buffer，) C4 p8 T6 }, C7 k0 I% O
说实话，别浪费时间摸条件了，从公司买现成的电转buffer吧...2 _& d$ l9 R/ \
不过个人很看好最后一个混合配方，我自己没有试过，
) ~( H. r0 y- V) ?1 l用各种盐成分配置成的Hanks' buffer和DMEM等相比，感觉有明显的不同，
4 a8 c! O! p7 c: ?因为都是离子成分，应该是电阻很小，电流很大，所需要的条件和DMEM相比应该不一样，
- o+ {; I! k: u2 S% ?9 a3 B$ K所以混合两者成分，应该是好一些...否则只用DMEM会比较钝(？个人理解)..., A% j3 X' M* s
% I+ U8 v6 j! R
同时质粒的纯度要很高，如果你只测260/280或260/230是不可能看出来质粒的纯度的...% q' v  n0 h5 O8 [" g; t
高纯度的质粒转染效率会明显(?也许只是稍微)高于低纯度的质粒...
  H# ?5 v3 O' O- S0 @
/ ^4 E- e0 i5 l% L  q$ }8 g希望idealgas会很快做出来...
& B& b4 {* s; A5 a- L谢谢您的回信！在此回复，以示感谢！2 H. R( J& g1 P" d

miRNA

不过假如有的实验室条件已经摸成熟了，都是用的自己配置的buffer,, z& y% b+ q1 f: s. `
那就另当别论了...
3 S2 q- {/ q' m0 g% v1 C0 \( m- m/ K2 m3 ?
请"细胞海洋"指点一二...

miRNA

回复 懵懂干细胞 的帖子7 @& {8 u4 y$ U4 e. w6 s" K; ^- R

- |) y3 J( Z, JPBS都可以，天哪，那您给推荐一下成纤维细胞大致的参数呗...