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楼主: idealgas
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[请教] 电转染牛成纤维细胞的问题   [复制链接]

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楼主
发表于 2012-5-28 20:21 |显示全部帖子
稍等一下,我把所有的buffer都整理一下,发出来....

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沙发
发表于 2012-5-28 20:24 |显示全部帖子
Hank’s buffer:
: a& b2 \/ r& `9 `4 A" K5 q
; F. r. R' ^! u# r/ J" |137 mM NaCl; / w( J  w3 J8 N# l4 R) f
5.4 mM KCl; ! e. K  m+ E; R7 {" g
0.95 mM CaCl2;
( X" p( N- R6 |) g( q) K0.41 mM MgSO4; ! q# |1 L0 }. B5 L9 D2 w$ d
0.49 mM MgCl2; - C  J2 u( X' V0 U7 L7 G
4.17 mM NaHCO3; 4 S$ h1 S" y4 l* x; d5 a( Z* @
0.34 mM Na2HPO4; / Y/ L, E9 e( Q7 I. o
0.44 mM KH2PO4;  
: E: G0 M$ O. r& Q20 mM HEPES, pH 7.2 : ?5 t- ]2 p1 {/ S% b& j! D

+ w: P3 N$ F3 j0 k可以直接购买来自HyClone Hanks' Balanced Salt Solutions(HBSS)。
1 H5 v. C8 ~2 C( d* n, ^) d来自文章---Efficient expression of foreign genes in CHO DHFR(-) cells by electroporation
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藤椅
发表于 2012-5-28 20:25 |显示全部帖子
Berg’s buffer9 J/ d! N4 Q3 G; N3 Y9 c

" Q+ g( J* q8 t+ s, M, j" W. A; e7 b* P  x6 F. F7 S- n9 P- G
名称        需要量        分子量        配制100ml所需# W4 Z  Z5 _$ o& i8 l
NaCl        137 mM        58.44        0.8g
2 C7 O! E! b) g$ }$ XKCl        5 mM        74.55        0.037g
& ]3 r( D, W8 L) jNa2HPO4  (-12H2O)        0.7 mM        358.14        0.025g
3 D8 J5 R% z0 H6 N) l+ {# aHEPES    (pH 7.05)        20 mM          238.30        0.4766g
3 y6 L' S' J1 s6 J* x  m( t( l) Pdextrose        6 mM        198.17        0.118902g7 N6 O1 a. G: I! e
2 c+ Y: j) B6 C/ @
同样来自文章---Efficient expression of foreign genes in CHO DHFR(-) cells by electroporation

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板凳
发表于 2012-5-28 20:27 |显示全部帖子
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还有Cytomix buffer,文章里面有,就不列出来了...

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报纸
发表于 2012-5-28 20:28 |显示全部帖子
Optimization of square-wave electroporation for transfection of porcine fetal fibroblasts7 }6 F0 I& J2 C" ~! E3 d
这篇文章里面用的是混合配方:
8 B. @2 p& G$ v+ h* \) [1 ECells were resuspended in transfection media (75% cytosalts [120 mM KCl, 0.15 mM CaCl2, 10 mM K2HPO4; pH 7.6, 5 mM MgCl2] (van den Hoff et al.1992) and 25% Opti-MEM)
( G" F5 M& I3 ?$ n9 l  Z0 P6 B
3 T1 o, H4 J$ Y4 F/ Y

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地板
发表于 2012-5-28 20:38 |显示全部帖子
我自己试过1640,DMEM,Hanks' buffer,5 ]  s: I6 y" i  l) ?1 |( m) Z
说实话,别浪费时间摸条件了,从公司买现成的电转buffer吧...
- k$ [* j; @& I不过个人很看好最后一个混合配方,我自己没有试过,
3 W& r: {. O. h3 A9 I4 `用各种盐成分配置成的Hanks' buffer和DMEM等相比,感觉有明显的不同,& u, A- B9 _+ L5 L
因为都是离子成分,应该是电阻很小,电流很大,所需要的条件和DMEM相比应该不一样,/ o# k0 G7 k! h4 V; a. P
所以混合两者成分,应该是好一些...否则只用DMEM会比较钝(?个人理解)...1 c3 M/ |& W! j5 N( e

) K2 D9 s+ F. P# Q  V8 M同时质粒的纯度要很高,如果你只测260/280或260/230是不可能看出来质粒的纯度的...2 r" D/ l+ B" h: K  C/ A
高纯度的质粒转染效率会明显(?也许只是稍微)高于低纯度的质粒...
6 b; C! e8 |/ x  a% _# I; K' f+ g/ C5 K
希望idealgas会很快做出来...
! ~7 O0 ?+ @; L4 {5 ^谢谢您的回信!在此回复,以示感谢!) V6 U2 i/ @2 H# e4 B. l/ E; @
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发表于 2012-5-28 20:44 |显示全部帖子
不过假如有的实验室条件已经摸成熟了,都是用的自己配置的buffer,
$ `+ h& ?. S7 Q& T/ {- S那就另当别论了...
% ?  H/ v; w  J& D- c- p' S+ D2 _+ N$ G9 Z% ^: d  V
请"细胞海洋"指点一二...

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发表于 2012-5-28 23:45 |显示全部帖子
回复 懵懂干细胞 的帖子6 f9 H) X  `' M' [

4 u$ Z( A$ o* i7 A) FPBS都可以,天哪,那您给推荐一下成纤维细胞大致的参数呗...
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