干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

注册

找回密码

 

 

搜索
干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 › 干细胞之家论坛 › 干细胞实验室技术交流 › 实验室综合讨论区 › 电转染牛成纤维细胞的问题
中源协和

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 122643|回复: 37
 go

[请教] 电转染牛成纤维细胞的问题   [复制链接]

idealgas

Rank: 2

积分
187 
威望
187  
包包
683  
楼主
发表于 2011-4-13 14:41 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
干细胞之家微信公众号
最近在做电击转染牛成纤维细胞的实验。
2 d7 E; o  M+ ^  H+ M, C仪器设备为 biorad的 genepulser MXcell，用的是电极杯做转染。转染用的缓冲液为DMEM 高糖无血清培养基。细胞为牛胎儿成纤维细胞，质粒为构建的一个带有DsRed 2标记的质粒，各种电击条件都摸索了，包括方波和递减指数波，而且电击前后细胞计数结果能够达到50%的死亡率，但是24小时和48小时时观察细胞荧光情况，居然没有一个细胞发光，不知道为什么，还请各位做过多次电转或者电转高手来解答。非常感谢。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

收藏1 分享0 顶0 踩0
回复 引用

举报 返回顶部

cony

Rank: 3Rank: 3

积分
439 
威望
439  
包包
773  

优秀会员 热心会员 小小研究员 帅哥研究员 积极份子

沙发
发表于 2011-4-13 21:11 |只看该作者
我做过一段时间电转，除了电击参数很重要外，DNA纯度，DNA与细胞比例也很重要。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

回复 引用

举报 返回顶部

trl137

Rank: 3Rank: 3

积分
307 
威望
307  
包包
1118  

优秀会员 金话筒

藤椅
发表于 2011-4-13 21:20 |只看该作者
我做过一段时间牛胎儿皮肤成纤维细胞的转染，我一般用的都是DMEM低糖无血清培养基，你可以试试。其实影响转染效率的因素很多，不仅有电转各种参数，还与所转DNA的量、浓度，以及细胞密度等相关。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

回复 引用

举报 返回顶部

runsong

Rank: 3Rank: 3

积分
955 
威望
955  
包包
755  

热心会员 优秀会员 小小研究员 积极份子 帅哥研究员 美女研究员 金话筒 精华勋章

板凳
发表于 2011-4-13 23:48 |只看该作者
没用电转液吗。电击时细胞应该悬浮在电转液里。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

回复 引用

举报 返回顶部

runsong

Rank: 3Rank: 3

积分
955 
威望
955  
包包
755  

热心会员 优秀会员 小小研究员 积极份子 帅哥研究员 美女研究员 金话筒 精华勋章

报纸
发表于 2011-4-13 23:49 |只看该作者
电转液配方

Optimization of square-wave electroporation for transfection of porcine fetal &.pdf

376.49 KB, 下载次数: 793

已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

回复 引用

举报 返回顶部

idealgas

Rank: 2

积分
187 
威望
187  
包包
683  
地板
发表于 2011-4-16 22:26 |只看该作者
回复 runsong 的帖子
! C! P' r6 ~7 r  \& U6 |1 P: c+ u8 y9 P/ K/ |
谢谢您的回复，能把配方发到我的邮箱吗？不知道为什么下载不下来。idealgas@Foxmail.com谢谢谢谢。
回复 引用

举报 返回顶部

idealgas

Rank: 2

积分
187 
威望
187  
包包
683  
7楼
发表于 2011-4-16 22:28 |只看该作者
回复 trl137 的帖子% [! G$ Z9 U3 P% M# _
- G' j) u9 y, ~- t6 f
我用的是10μg对应1×10^7个细胞，质粒用仪器测过，纯度很好。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

回复 引用

举报 返回顶部

trl137

Rank: 3Rank: 3

积分
307 
威望
307  
包包
1118  

优秀会员 金话筒

8楼
发表于 2011-4-16 22:46 |只看该作者
既然你排除了上述几种因素，那就试试低糖培养液
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

回复 引用

举报 返回顶部

细胞海洋

Rank: 8Rank: 8

积分
306 
威望
306  
包包
3650  

小小研究员

9楼
发表于 2011-4-17 10:11 |只看该作者
回复 idealgas 的帖子! d0 w: ?: o8 ^7 P

- l- V3 O: {* ?可以下载 不要使用迅雷
回复 引用

举报 返回顶部

如以莫

Rank: 1

积分
0 
威望
0  
包包
1  
10楼
发表于 2012-5-13 14:37 |只看该作者
同求电转液配方
回复 引用

举报 返回顶部

‹ 上一主题|下一主题 ›
1234下一页
返回列表 发新帖 回复
高级模式 | 发表帖子
B Color Image Link Quote Code Smilies
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2026-9-14 19:35

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.