电转染牛成纤维细胞的问题

miRNA

不过假如有的实验室条件已经摸成熟了，都是用的自己配置的buffer,( S5 ^2 F- I8 G, i
那就另当别论了...9 G' G2 L0 U2 U$ J

8 {( p7 T$ F1 B6 z9 }& n  `0 `请"细胞海洋"指点一二...

懵懂干细胞

回复 idealgas 的帖子9 s: N+ F7 p# ?# c
/ U' }. i% O$ F1 S
电穿孔转染，你把你转质粒大小，质粒转进去的用处说一下吧，前一段时间我转过几个质粒，都没问题，荧光表达率蛮高的，细胞死亡率也没有像你说的那么大，把你的电转操作说一下吧

懵懂干细胞

回复 如以莫 的帖子' p/ d. P5 Y, e. D/ K( A
1 q( t" R$ X" a
我用的PBS，不含钙镁离子的

miRNA

回复 懵懂干细胞 的帖子" b2 Z5 G6 T, R7 J

  {, F& s: t* y# T+ x: R4 s- aPBS都可以，天哪，那您给推荐一下成纤维细胞大致的参数呗...

细胞海洋

回复 wxl87 的帖子
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+ S; E0 Q( Z) Z刷新一下 首先左键点击附件 扣分后下载. R0 F3 ?& \' E. o1 ^

懵懂干细胞

回复 miRNA 的帖子
/ l; J- ]* p' g: B. G( w# H  V% c, ~3 V6 ?
我是直接找仪器公司技术部要的protocal，然后再看看行不行。去要吧

idealgas

回复 懵懂干细胞 的帖子
+ D: ~" C, V3 C' }! H. \4 C  X! i8 g$ o# U6 w+ n, S0 P- t
唉，好久已经不做电转了，实验室其他人用这个仪器也是做不出来，就直接脂质体了。质粒大小在4K左右，转染后要筛选基因打靶细胞。现在用脂质体转染，invitrogen的LTX。摸的条件还可以，大约在20%左右。我需要一个细胞同时转入3种质粒，质粒大小大约都是4K。但是脂质体对DNA包装量的限制，和脂质体的毒性，没办法加大质粒用量和脂质体用量。于是现在老师说让我再试试电转染。毕竟电转染是物理损伤细胞，质粒加大量也没问题。我的一个师弟现在降低细胞数量，约10^5个细胞，对应1μgDNA进行电转染。换了BTX的一个电转仪再重新摸索下条件做。谢谢大家对我的帮助！

idealgas

回复 miRNA 的帖子
: S2 I! ~# }5 h, d- f  }- d# j
% V, j8 M! }. U! k' _大家互相帮助嘛。没有试过那么多的转染用液体。实验室有脂质体，就直接用脂质体了。但是也有一定限制，按需要选择吧。

genedu

回复 runsong 的帖子* e+ F1 y9 R3 ~3 x4 _
' D* m3 u' G5 w7 b% Y, \
PDF不能下，却去包包，这是一种什么行为？！

genedu

建议用LONZA公司的pMax-GFP质粒试试，这样几个小时之后就能观察电转效率了