电转染牛成纤维细胞的问题

miRNA

不过假如有的实验室条件已经摸成熟了，都是用的自己配置的buffer,
  u( d' K$ f# F" z  u' r4 @那就另当别论了...
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  w2 h# y4 X3 x$ F& W6 I请"细胞海洋"指点一二...

懵懂干细胞

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, y: c7 q+ w, ^; O+ p2 ~
2 i6 M) ~. b4 \电穿孔转染，你把你转质粒大小，质粒转进去的用处说一下吧，前一段时间我转过几个质粒，都没问题，荧光表达率蛮高的，细胞死亡率也没有像你说的那么大，把你的电转操作说一下吧

懵懂干细胞

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我用的PBS，不含钙镁离子的

miRNA

回复 懵懂干细胞 的帖子' f7 q5 V% o% w/ U) J& w/ v9 [

  D0 D9 O6 r+ A. u' rPBS都可以，天哪，那您给推荐一下成纤维细胞大致的参数呗...

细胞海洋

回复 wxl87 的帖子
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7 M: R: Y- w% @$ s: k刷新一下 首先左键点击附件 扣分后下载
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懵懂干细胞

回复 miRNA 的帖子' D4 k; }6 ?' ^5 |' |
+ Y7 Y; }) w2 B
我是直接找仪器公司技术部要的protocal，然后再看看行不行。去要吧

idealgas

回复 懵懂干细胞 的帖子7 ?- }/ r7 A: m; k0 J" l

7 L6 w; ]0 ^/ C# t% J% M唉，好久已经不做电转了，实验室其他人用这个仪器也是做不出来，就直接脂质体了。质粒大小在4K左右，转染后要筛选基因打靶细胞。现在用脂质体转染，invitrogen的LTX。摸的条件还可以，大约在20%左右。我需要一个细胞同时转入3种质粒，质粒大小大约都是4K。但是脂质体对DNA包装量的限制，和脂质体的毒性，没办法加大质粒用量和脂质体用量。于是现在老师说让我再试试电转染。毕竟电转染是物理损伤细胞，质粒加大量也没问题。我的一个师弟现在降低细胞数量，约10^5个细胞，对应1μgDNA进行电转染。换了BTX的一个电转仪再重新摸索下条件做。谢谢大家对我的帮助！

idealgas

回复 miRNA 的帖子9 ~$ N& O% c# y0 B$ p, J/ }6 L

% ]! O! V* U4 `# |3 Y2 N+ s大家互相帮助嘛。没有试过那么多的转染用液体。实验室有脂质体，就直接用脂质体了。但是也有一定限制，按需要选择吧。

genedu

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) `0 ?6 L! B# h( a9 b1 l2 x# D# M$ ?3 A
* r: B& ~( r% Q* P2 S# }7 WPDF不能下，却去包包，这是一种什么行为？！

genedu

建议用LONZA公司的pMax-GFP质粒试试，这样几个小时之后就能观察电转效率了