电转染牛成纤维细胞的问题

miRNA

不过假如有的实验室条件已经摸成熟了，都是用的自己配置的buffer,
: ^6 H1 f! N! l; z4 N' A那就另当别论了...! w" ~% Q# a' U- d+ L7 Z
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请"细胞海洋"指点一二...

懵懂干细胞

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电穿孔转染，你把你转质粒大小，质粒转进去的用处说一下吧，前一段时间我转过几个质粒，都没问题，荧光表达率蛮高的，细胞死亡率也没有像你说的那么大，把你的电转操作说一下吧

懵懂干细胞

回复 如以莫 的帖子. T+ O3 q; l6 z4 k
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我用的PBS，不含钙镁离子的

miRNA

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- J; E" J, ?% D5 _" R  P' T4 c& u& J
PBS都可以，天哪，那您给推荐一下成纤维细胞大致的参数呗...

细胞海洋

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, l7 ?- F9 D0 w" w, b7 u刷新一下 首先左键点击附件 扣分后下载; x% m/ ]2 b! x/ M

懵懂干细胞

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我是直接找仪器公司技术部要的protocal，然后再看看行不行。去要吧

idealgas

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- W+ n( Z" ]. c) ?+ [' ]2 Z$ D* z
唉，好久已经不做电转了，实验室其他人用这个仪器也是做不出来，就直接脂质体了。质粒大小在4K左右，转染后要筛选基因打靶细胞。现在用脂质体转染，invitrogen的LTX。摸的条件还可以，大约在20%左右。我需要一个细胞同时转入3种质粒，质粒大小大约都是4K。但是脂质体对DNA包装量的限制，和脂质体的毒性，没办法加大质粒用量和脂质体用量。于是现在老师说让我再试试电转染。毕竟电转染是物理损伤细胞，质粒加大量也没问题。我的一个师弟现在降低细胞数量，约10^5个细胞，对应1μgDNA进行电转染。换了BTX的一个电转仪再重新摸索下条件做。谢谢大家对我的帮助！

idealgas

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- f. {" f( J" i3 P7 @$ u2 t1 f. c  {; ^( P" _( I
大家互相帮助嘛。没有试过那么多的转染用液体。实验室有脂质体，就直接用脂质体了。但是也有一定限制，按需要选择吧。

genedu

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# ?0 a- }! e1 h% G* \3 C- I& APDF不能下，却去包包，这是一种什么行为？！

genedu

建议用LONZA公司的pMax-GFP质粒试试，这样几个小时之后就能观察电转效率了