电转染牛成纤维细胞的问题

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最近在做电击转染牛成纤维细胞的实验。+ @8 [2 |2 o( ]+ r& a4 z" t5 r
仪器设备为 biorad的 genepulser MXcell，用的是电极杯做转染。转染用的缓冲液为DMEM 高糖无血清培养基。细胞为牛胎儿成纤维细胞，质粒为构建的一个带有DsRed 2标记的质粒，各种电击条件都摸索了，包括方波和递减指数波，而且电击前后细胞计数结果能够达到50%的死亡率，但是24小时和48小时时观察细胞荧光情况，居然没有一个细胞发光，不知道为什么，还请各位做过多次电转或者电转高手来解答。非常感谢。

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8 O  t% P* x- a0 f9 ?$ J- Y5 o谢谢您的回复，能把配方发到我的邮箱吗？不知道为什么下载不下来。idealgas@Foxmail.com谢谢谢谢。

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我用的是10μg对应1×10^7个细胞，质粒用仪器测过，纯度很好。

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回复 懵懂干细胞 的帖子% V9 P5 e2 G# M% D. B, X+ A- T

3 t; p: K0 s3 L: ]5 m" N唉，好久已经不做电转了，实验室其他人用这个仪器也是做不出来，就直接脂质体了。质粒大小在4K左右，转染后要筛选基因打靶细胞。现在用脂质体转染，invitrogen的LTX。摸的条件还可以，大约在20%左右。我需要一个细胞同时转入3种质粒，质粒大小大约都是4K。但是脂质体对DNA包装量的限制，和脂质体的毒性，没办法加大质粒用量和脂质体用量。于是现在老师说让我再试试电转染。毕竟电转染是物理损伤细胞，质粒加大量也没问题。我的一个师弟现在降低细胞数量，约10^5个细胞，对应1μgDNA进行电转染。换了BTX的一个电转仪再重新摸索下条件做。谢谢大家对我的帮助！

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9 h8 q) `. E1 n大家互相帮助嘛。没有试过那么多的转染用液体。实验室有脂质体，就直接用脂质体了。但是也有一定限制，按需要选择吧。