电转染牛成纤维细胞的问题

idealgas

最近在做电击转染牛成纤维细胞的实验。
+ X& @5 k* A/ n. W- _4 y9 N' l仪器设备为 biorad的 genepulser MXcell，用的是电极杯做转染。转染用的缓冲液为DMEM 高糖无血清培养基。细胞为牛胎儿成纤维细胞，质粒为构建的一个带有DsRed 2标记的质粒，各种电击条件都摸索了，包括方波和递减指数波，而且电击前后细胞计数结果能够达到50%的死亡率，但是24小时和48小时时观察细胞荧光情况，居然没有一个细胞发光，不知道为什么，还请各位做过多次电转或者电转高手来解答。非常感谢。

apsuifeng

建议你尝试一下Lonza 的核转染仪，有专门的protocol 和试剂，以前用这个仪器转染过效果不错，可以试一下。

apsuifeng

细胞的电转染效率影响因素很多，不知道楼主质粒大小如何，一般在大于10kbp以上时对于转质粒的纯度和浓度要求严格，另外用伯乐的仪器转染时很多实验者会将细胞放于冰上进行转染，目的是减缓细胞周围纳米孔的闭合，增加质粒进入细胞的量，从而提高转染效率。我之前也转染过牛的成纤维细胞，化学方法转染效果不佳。

liuyasi2008

谢谢，准备做这个的7 N" b1 v0 C  s: c$ z0 s

lsjj619

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( G! B; g" `& s3 [3 `9 {8 H! i' G+ h' a/ }  ], m
当然用了，是买的Biorad的电转液

genedu

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0 ^6 h4 ?4 A( z9 v+ f" N& ~回复 runsong 的帖子3 ^. n& I5 g8 t

2 f* S* ~( h  K; U  S3 U不好意思哈，是我激动了，，多谢

细胞海洋

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- C( S7 I, }6 v) ^& d
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runsong

3 B5 h9 U: @) ^& K7 X$ E. z) D! i, D5 O- e4 l, ]& D7 A
回复 genedu 的帖子3 i- }) E! o( X& B
3 T, n$ ^/ h: |. A& d
这和我有什么关系，你的邮箱给我，想要的话给你发。

genedu

建议用LONZA公司的pMax-GFP质粒试试，这样几个小时之后就能观察电转效率了