干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
中源协和

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
楼主: idealgas
go

[请教] 电转染牛成纤维细胞的问题   [复制链接]

Rank: 1

积分
48 
威望
48  
包包
97  
19楼
发表于 2012-5-28 20:28 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
Optimization of square-wave electroporation for transfection of porcine fetal fibroblasts
# [/ B4 i2 E+ C  P3 H  Q这篇文章里面用的是混合配方:
* b5 U) P9 a5 U4 i2 `Cells were resuspended in transfection media (75% cytosalts [120 mM KCl, 0.15 mM CaCl2, 10 mM K2HPO4; pH 7.6, 5 mM MgCl2] (van den Hoff et al.1992) and 25% Opti-MEM)
4 m% E6 W$ M& \2 F; g
* e0 T+ K% v$ ^; O4 T6 b% n' g: K0 i

Rank: 1

积分
48 
威望
48  
包包
97  
18楼
发表于 2012-5-28 20:27 |只看该作者
还有Cytomix buffer,文章里面有,就不列出来了...

Rank: 1

积分
48 
威望
48  
包包
97  
17楼
发表于 2012-5-28 20:25 |只看该作者
Berg’s buffer( E& h7 H/ Q/ O' s4 M/ z# f

& u( P7 A6 i% n  T3 E# f. r* ]- \
名称        需要量        分子量        配制100ml所需
' x( n& K. X, e, y7 ?& a/ s9 [) }NaCl        137 mM        58.44        0.8g
. B7 t( Y& i; u# {+ p: oKCl        5 mM        74.55        0.037g
8 \! g4 y8 j6 U% }Na2HPO4  (-12H2O)        0.7 mM        358.14        0.025g
+ J4 H3 s1 n3 a1 F. NHEPES    (pH 7.05)        20 mM          238.30        0.4766g
/ s) ]# g* Z. T9 p  M6 a2 O8 qdextrose        6 mM        198.17        0.118902g/ }7 j0 a6 P! h7 P, s

8 x) \4 Q5 j) S2 A# Q2 b7 @: A5 E9 z同样来自文章---Efficient expression of foreign genes in CHO DHFR(-) cells by electroporation

Rank: 1

积分
48 
威望
48  
包包
97  
16楼
发表于 2012-5-28 20:24 |只看该作者
Hank’s buffer:. p/ E4 F/ N# K' ^# f* [1 t
0 y2 E6 w6 b& \2 j7 @# d; a
137 mM NaCl; 1 h$ B5 d, o& j5 Q! M/ y5 z
5.4 mM KCl; . {3 t3 {  e2 ~" |! r* e- X
0.95 mM CaCl2;
7 c. u6 V  @3 m" P) i5 K4 D0.41 mM MgSO4; 3 K, t* s% d" u( r/ `! z. C
0.49 mM MgCl2;
) U8 _9 r8 k) C0 z2 ^4.17 mM NaHCO3; : S5 [0 n+ [- m( t
0.34 mM Na2HPO4; " x: ~. j% n! k' ~  l
0.44 mM KH2PO4;  
8 M$ g% Y% m2 c20 mM HEPES, pH 7.2 ( z9 z7 \9 s1 W7 k6 K; n

3 I" T5 h  J5 m0 H/ G可以直接购买来自HyClone Hanks' Balanced Salt Solutions(HBSS)。" ?: x# Z1 @5 J& C8 m6 M
来自文章---Efficient expression of foreign genes in CHO DHFR(-) cells by electroporation
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 1

积分
48 
威望
48  
包包
97  
15楼
发表于 2012-5-28 20:21 |只看该作者
稍等一下,我把所有的buffer都整理一下,发出来....

Rank: 3Rank: 3

积分
769 
威望
769  
包包
998  

优秀会员 金话筒

14楼
发表于 2012-5-28 16:14 |只看该作者
不知道你的质粒中的Red2有没有活性?建议先转染一下293细胞看看有没有活性.祝好运!
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 4

积分
2199 
威望
2199  
包包
5384  

优秀会员 金话筒

13楼
发表于 2012-5-28 13:32 |只看该作者
质粒需要线性化3 ~  ]7 E/ s7 ~3 I9 `
细胞需要单细胞悬浮9 T: a8 x5 X! V4 _& U2 w
介质建议使用商品( ^: u% R+ r% k6 P* [+ d; g
但DMEDM和PBS也可以使用,没很大区别2 R2 Z8 q0 y1 ?/ t$ l; @
另外50%死亡也不是必须的,死亡率也不是评估电转正常的关键指标啊,没必要看中这点
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 8 + 15 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 8  包包 + 15   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
304 
威望
304  
包包
2996  

优秀会员 研讨会精英 帅哥研究员

12楼
发表于 2012-5-28 12:47 |只看该作者
质粒DNA最好要线性化,而且在电击以后,用自带的吸管吸出细胞,不要用枪头9 r! u! m$ D% r4 j) j! Q/ u4 a0 F
而且看看你的荧光镜有没有问题
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
304 
威望
304  
包包
2996  

优秀会员 研讨会精英 帅哥研究员

11楼
发表于 2012-5-28 12:43 |只看该作者
回复 runsong 的帖子
6 h/ u, `, ]8 O, [  ^' m4 U- f. E/ r  |# \$ g9 X
你的附件下载不了,解决一下

360截图20120528124212636.jpg (33.94 KB, 下载次数: 214)

360截图20120528124212636.jpg

Rank: 1

积分
0 
威望
0  
包包
1  
10楼
发表于 2012-5-13 14:37 |只看该作者
同求电转液配方
‹ 上一主题|下一主题 ›
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2026-11-4 05:22

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.