MEF原代细胞污染的问题

varing

    晚上做原代 没加双抗，第二天发现有比MEF体积小的杆状污染物，比较多。请问是什么类型的污染。. f/ U9 G  `! d1 a6 L
   早上用PBS洗了N次细胞，又加了双抗不知能不能消除。洗了以后，污染物少了，但还是比较严重的污染。
) i; N+ R% T6 ~* T   请问大神们，这样的污染该怎么处理。8 w1 n" E% C0 a/ b* P# O

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dqm185

你发现的应该是革兰氏阴性杆菌，可能为枯草杆菌，绿脓杆菌或大肠杆菌，属于细菌污染。养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡。
5 {; A$ Q9 J5 B) [; w9 G* ~个人建议，重新做原代，改变后的细胞做出来的数据不一定可信。
- }* ^2 I" ?8 q4 K, t8 d6 [8 m如果真想清除，则参考以下方法：4 Z0 W7 q5 z  ^
抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双抗生素(青霉素100u/ml加链霉素100μg/ml)，污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍的冲洗法，于加药后作用24～48小时，再换常规培养液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品种除青霉素、链霉素外，还可用庆大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四环素、制霉菌素等。常用400～800μg/ml卡那霉素或200μg/ml四环素处理，每隔2～3日换液1次，传1～2代进行治疗。8 V2 ^' I/ E0 z* \4 W
参考资料：http://www.tobacco.gov.cn/html/2 ... 060302/68326_n.html
: z# r9 M1 W; S* Y/ Rhttp://www.douban.com/group/topic/1999921/; [% H8 I( x& M0 K' \2 u) e
http://www.hopebiol.com/asphtml/refere4100.htm
& [$ O) V4 U/ f/ Ghttp://www.biosou.com/index_newshow.php?newsid=74766) G+ g/ ^% H. N& b) a; g4 p

sunny2829

没有图片吗？？
. P) ^( @9 G  n9 @如果是细菌污染的话，别救了，重新原代培养吧。加双抗没多大用处，只是看似恢复而已，过一段时间还是回爆发的~~~

aminhair

细菌污染！连续加大双抗使用量直至污染消失。接触污染物的东西全部灭菌。培养箱用酒精棉球擦拭或灭菌（仪器自身带有此功能才可以）。然后将双抗量下降。

redcam

建议采用含双抗的培养液重做原代培养。污染的原因很多，但据你的描述应该是人为操作不当引起的，建议小心操作，避免污染。