MEF原代细胞污染的问题

varing

    晚上做原代 没加双抗，第二天发现有比MEF体积小的杆状污染物，比较多。请问是什么类型的污染。/ k3 x# g: a& @% j* j
   早上用PBS洗了N次细胞，又加了双抗不知能不能消除。洗了以后，污染物少了，但还是比较严重的污染。
9 _9 V# h/ R7 k4 e0 x- u/ Z. T* c6 }   请问大神们，这样的污染该怎么处理。' a/ }3 \  _& F# l: Q- [

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dqm185

你发现的应该是革兰氏阴性杆菌，可能为枯草杆菌，绿脓杆菌或大肠杆菌，属于细菌污染。养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡。
  f! M( d1 V( [, {* L" ~& P8 w个人建议，重新做原代，改变后的细胞做出来的数据不一定可信。+ ?% h/ y8 ~4 f) h  O& |% }
如果真想清除，则参考以下方法：
! j$ w; J+ [. d! s: k; ~, e5 V$ L4 x抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双抗生素(青霉素100u/ml加链霉素100μg/ml)，污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍的冲洗法，于加药后作用24～48小时，再换常规培养液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品种除青霉素、链霉素外，还可用庆大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四环素、制霉菌素等。常用400～800μg/ml卡那霉素或200μg/ml四环素处理，每隔2～3日换液1次，传1～2代进行治疗。
7 z2 F4 q: ?! }( Z参考资料：http://www.tobacco.gov.cn/html/2 ... 060302/68326_n.html; M  u: m# D' E7 e- }8 I
http://www.douban.com/group/topic/1999921/& N4 ]- l$ `% H! W5 W& X' \9 v5 D
http://www.hopebiol.com/asphtml/refere4100.htm7 N, o9 j7 d: V0 L
http://www.biosou.com/index_newshow.php?newsid=74766
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sunny2829

没有图片吗？？
% a, [" U2 a: v7 M" N* O如果是细菌污染的话，别救了，重新原代培养吧。加双抗没多大用处，只是看似恢复而已，过一段时间还是回爆发的~~~

aminhair

细菌污染！连续加大双抗使用量直至污染消失。接触污染物的东西全部灭菌。培养箱用酒精棉球擦拭或灭菌（仪器自身带有此功能才可以）。然后将双抗量下降。

redcam

建议采用含双抗的培养液重做原代培养。污染的原因很多，但据你的描述应该是人为操作不当引起的，建议小心操作，避免污染。