肿瘤细胞复苏后为什么不能存活？

amosummer

年前回家冻存了一批细胞，年后回来复苏重新培养。我冻存用的是90%+10%DMSO，步骤是直接放-80°。但复苏后发现细胞两星期都没有长出来，里面飘着星星点点类似血细胞的东西，一个师兄说是细胞碎片，没有真正的细胞。不知道是什么原因导致的，是否我冻存的方法不好呢，或是复苏的时候需要什么特殊条件吗？

hndxws

冻存方法有问题。直接放-80是错误的。冻存应该是慢冻快溶。一下子放-80，细胞几乎都会死的。可以网上搜一下冻存与复苏的方法，改进一下。

nicolelea

如果直接放-80，需要一个缓慢降温的冰盒，或者至少你要用泡沫啥的给它包起来，让它慢慢冷却。【快复慢冻，以防止冰晶破裂，引起细胞受损】6 q) r) P3 e# e! \
有条件，可以买个商品化的冰盒。
* E1 A; i4 G. }2 @, A/ V' z* c1 F没条件，我们实验室是4°C，30min; -20°C 30min（或冻实）；-80过夜；液氮保存。【这个是冻一般肿瘤细胞的，不知道你的是啥细胞】
, _$ X" G$ y4 P. [. a! _8 G另外，冻存效果和你离心也有关系，离心力不能太大，太大细胞也会破。# g  D; R" W8 U. M2 Q) F5 c

懵懂干细胞

楼主所说的直接放-80是用什么放的呢？冻存盒吗？如果是程序降温（异丙醇的作用）的冻存盒的话应该就没有问题！  ]. B7 u. G6 v' r
相关的注意事项其实和培养细胞没什么太大的区别！  R2 n, N+ w* _) d2 C, g) |
如果一直放在-80不转入液氮管冻存的话，时间久了细胞也会死亡的！4 L) X  ^1 c: C, M

jiays

都冻死了
& F2 G2 D5 s8 R% Y