DMSO-free的冻存液？这个可以有

deron

主题：无DMSO脐带血间充质干细胞的冻存  c- N9 j* U7 q5 o
' C0 X9 P7 A4 M& U$ W$ J6 A
说明：原文来源自http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21468457，由干细胞之家新闻小组成员deron翻译（转帖请注明）。3 R; ?4 X5 L6 L/ O3 q

# M0 k. ]$ w/ n& g5 h翻译内容：
4 U; m0 u" Z3 h* N脐带血间充质干细胞（UCB来源MSCs）的冻存是其细胞移植治疗临床应用中关键的一步。在MSCs的冻存中，DMSO已经广泛用做冷冻保护剂（CPA）。然而，众所周之DMSO对人体有毒副作用。本研究致力于发展无DMSO的CPA溶液用于脐带血间充质干细胞的冻存，其成分用乙二醇（EG）、1,2-丙二醇（PG）和蔗糖为基本CPAs，辅以聚乙烯醇（PVA）作添加物。脐带血间充质干细胞分别通过投入液氮中做玻璃化冻存以及通过可视化DSC新设备做程序降温冷冻冻存。解冻的脐带血间充质干细胞通过台盼蓝排除检测法测定活力。结果显示脐带血间充质干细胞玻璃化冻存中，解冻活力在加入PVA后从71.2%升至95.4%；但是其程控降温冻存的活力，仅仅从不到10% 升到45%。这些结果显示PVA在脐带血间充质干细胞的冻存中起到正相关作用，同时说明添加PVA的无DMSO的CPA溶液的玻璃化冻存可成为脐带血间充质干细胞冻存的一个有效方案。
# w3 |6 j1 J9 `. C" A原摘要：Cryopreservation of umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells (UCB-derived MSCs) is crucial step for its clinical applications in cell transplantation therapy. In the cryopreservation of MSCs, dimethyl sulfoxide has been widely used as a cryoprotectant (CPA). However, it has been proved that DMSO has toxic side effects to human body. In this study, DMSO-free CPA solutions which contained ethylene glycol (EG), 1, 2-propylene glycol (PG) and sucrose as basic CPAs, supplemented with polyvinyl alcohol (PVA) as an additive, were developed for the cryopreservation of UCB-derived MSCs. The cryopreservation of UCB-derived MSCs was achieved by vitrification via plunging into liquid nitrogen and by programmed freezing via an optical-DSC system respectively. The viability of thawed UCB-derived MSCs was tested by trypan blue exclusion assay. Results showed that the viability of thawed UCB-derived MSCs was enhanced from 71.2% to 95.4% in the presence of PVA for vitrification, but only < 10% to 45% of viability was found for programmed freezing. These results indicate that PVA exerts a beneficial effect on the cryopreservation of UCB-derived MSCs and suggest the vitrification in combination with the dimethyl sulfoxide free CPA solutions supplemented with PVA would be an efficient protocol for the cryopreservation of UCB-derived MSCs  g, [9 x: b8 d# q

& J. y$ w; i. u) D3 M$ h. r原文链接：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21468457（求原文）

deron

先是serum-free，而今是DMSO-free。冻存技术的发展真是让人振奋/ h7 e% C& N# Q7 l  B
文中提到的是在玻璃化冻存中应用其它冷冻保护剂替代DMSO，在PVA存在的前提下效果斐然。但是目前来讲，普通的冻存方法尚无法做到

sunsong7

还有商品化的呢： 不含有DMSO和血清的安全有效地细胞冻存液 New CryoScarless DMSO-Free7 d' i" f1 c6 }, t

$ S% D2 R# n' v4 Z. j完全不含具有高毒性冷冻保护剂（DMSO）和血清的新型细胞冻存液。能够进一步提高细胞冻存效果。
/ G5 b% S* c# `. |6 q, p; p* F5 v  T' S' ?0 M0 L
【特 征】
; u3 p1 k/ S4 J" |! C- T4 j$ \" e; E. m8 S, M7 s0 y7 C" q- M. t
低毒性：完全不含DMSO； - e  e" o' s7 `7 X9 y8 @
安全性：完全不含血清等动物蛋白质； 0 L/ n) f0 w/ G
可在低温冰箱（-80℃）长期冻存细胞； $ @3 U& T7 u- s. H3 C  Z
无需程序化降温，细胞冻存操作简便； 4 y) H2 o! K/ [2 O. U
细胞存活率可达90%以上；   J! T# f7 s2 n$ m3 A
能在保持部分干细胞分化潜能的状态下冻存。
  x# v7 D1 P4 k【使用方法】
: a+ u! t( J1 H7 }4 M# i8 a
6 J9 a8 e4 \) L■细胞冻存：
: h/ ^# F7 H+ n7 F$ H& J  z' G" T$ F4 @
收集对数生长期细胞制成细胞悬液。 ; g9 K( J8 K% J6 Z0 b
4-10℃离心弃上清，保留细胞沉淀，加入CryoScarless DMSO-Free重悬细胞，最适浓度为5 × 105 - 106细胞/mL。
/ x2 U# K6 ^6 F6 ~* }将细胞悬液分装至冻存管中，于- 80℃的低温冰箱中冻存。
2 V: F) j' e1 P9 B8 V# \% A6 }5 i  " w* W" y: u2 J# g' ]$ \% d
■细胞复苏：4 K" @; d2 ]4 N8 r+ @7 E# z5 b. |

# {1 ~0 W5 S+ F将冻存管取出迅速并置于37℃ 恒温水槽中轻轻摇晃使其快速解冻。（注意：浸入时不可触碰冻存管盖）
( I4 p/ u7 o0 M1 z0 h* n使用细胞培养或实验用的培养基（10ml左右）离心清洗。 0 {2 v6 }6 I8 ~7 \  N4 R
冻存细胞                    复苏24h细胞存活率/% 3 B0 k% j3 _7 l. ~, u& g
L929（小鼠成纤维细胞）        97.5 ± 1.2
% N& S% ]$ C5 ^( \3 b MG63（人骨肉瘤细胞）         93.1 ± 2.3 & Y" W  Q3 h+ x- X1 b2 o* w
HT1080（人成纤维肉瘤细胞）   90.2 ± 4.3
( @5 N$ P3 G5 i2 s2 i Colon26（小鼠结肠癌细胞）     92.3 ± 2.3 : Y. r% c7 d* x" P5 ?
B16F1（小鼠黑色素瘤细胞）     94.2 ± 0.6 / u! W4 e9 e! ?3 n) u, o  V
KB（人口腔癌细胞）            91.8 ± 0.9 0 U7 {4 j# A# r  d7 J
Caco2（人结肠癌细胞）         93.7 ± 1.9 & X+ O3 C; Z- p" L- p
MC3T3（小鼠胚胎成骨细胞）    94.4 ± 0.5
: I: }' m8 J2 V$ T9 h6 v; p Jurkat E6-1（人白血病细胞）    88.4 ± 2.5
) r& n7 ]1 D0 M1 H7 T* K  w HUVEC（人脐带静脉内皮细胞）  89.9 ± 0.4
/ Z: q4 l' ~, ]; J. h, I" g6 x HCAEC（人冠状动脉内皮细胞）  90.1 ± 1.6
8 h1 ^5 Y0 p8 J MEF（小鼠胚胎成纤维细胞）    94.4 ± 0.8
7 c) H  k7 S( Y7 X4 `3 b4 d' a hACh（人软骨细胞）           93.5 ± 0.7 ' B$ E& t  R0 k

shen_coco

回复 sunsong7 的帖子: m+ x# R* h5 j: Y, o- F& `

2 ^7 @1 ~( t! c/ `) ?4 w有木有这么神啊，神马公司的产品啊

deron

回复 sunsong7 的帖子5 }: w  N! ?: f; h7 M

% V9 |) l  k$ e3 {4 F3 w不知道它的主要成分是什么？应该也是一种或多种渗透性非渗透性冷冻保护剂吧

ditiger

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微微一笑

6 o% g. U( }* D" G0 t
; S: H+ ?1 J6 J7 ~
3楼能说一下是哪个公司的产品吗？型号？是下面这款吗?

FreeCell

回复 微微一笑 的帖子6 z. I0 j, ~( m! ~! Z$ ?3 a4 T8 J

# g& b7 L+ j/ R( V' J; T这里可以做广告？

afei198520

7楼的那个冻存液有人用过吗？冻的啥细胞？使用后效果如何？价格多少？

上帝帮我转运吧

回复 sunsong7 的帖子" m. D+ M" j; E% j# O( I# t
4 c$ ^; R7 \' y( a% c/ J
这个东西用起来实在太贵了，50ml近一千元，最多冻5*107细胞，平均200元/107，要是sigma D2650  100ml也一千多块钱，加上相应的血清算下最多10块钱，相差20多倍，乖乖，求指示啊！